枣树实生苗固有内生细菌的检测.pdfVIP

·生物技术· 枣树实生苗固有内生细菌的检测 侯晓杰 (衡水学院生命科学系，河北衡水053000) 摘要：通过光学显微镜、扫描电镜观察和分子检测方法对阜平大枣实生组培苗体内的固有 内生细菌进行了研究。结果表明：在光学显微镜1000倍下可观察到球状、短杆状和杆状细茵，其 大小分别为1．5～1．8 扩增该实生苗体内的16SrDNA时，检测到大小为1．5kb的细菌DNA特异性条带。 rDNA 关键词：枣；内生细菌；检测；光学显微镜；扫描电镜；16S 中图分类号：S665．1文献标识码：A 文章编号：1001--0009(201Z)22一0108一04 植物内生菌是指能够定殖在植物组织内不引起宿 对许多酵母菌有拮抗效果[13蜘。加拿大英属哥伦比亚 主任何症状的微生物[I]。内生细菌具有丰富的生物多 大学的研究人员发现，一种分离自黑松的内生芽孢杆菌 样性，其寄生在宿主体内，有足够的碳源、氮源，且受到 (Bacillus 植物组织保护，具有更稳定的环境，所以作为生防菌及 外源基因载体更容易发挥作用[2]。研究发现一部分植 胚珠及种子内分离到内生细菌。 物内生细菌还能使植物获益，如促进植物生长或抑菌 枣树是我国广泛栽培的特产果树，近年来，随着枣 等L3{]。种子内微生物群落被认为是影响种子性能和后产业的发展壮大，枣树病害也随之扩展蔓延，目前对枣 期植物生长的一个重要因素。一些种子内生细菌对真 疯病、枣缩果病等毁灭性病害的防治尚无有效的方法， 菌有拮抗作用[6]。 枣炭疽病等病害的防治也只限于化学药剂的使用。该 我国科研人员从黄瓜种子及实生苗内分离得到了 试验用不同方法检测枣树体内的固有内生细菌，为更好 芽孢杆菌属、土壤杆菌属、黄单胞菌属、假单胞菌属、欧 地利用植物内生菌防治枣树病害奠定基础。 文氏菌属和短小杆菌属的大量内生细菌，为进一步筛选 1材料与方法 拮抗黄瓜病害的内生细菌提供了必要的基础口]。油菜 1．1试验材料 种子内生菌带菌率很高，这些内生菌的存在不仅影响种 风干的阜平大枣果实，置于4℃冰箱中备用。 子的萌发和无菌苗的生长，而且在油菜无菌苗对菌核病 1．2试验方法 的抗性鉴定中会严重干扰油菜菌核病菌的繁殖和自发 1．2．1阜平大枣实生苗的培养将阜平大枣果实外果 接种婀。t976年，Mundt等[9]研究了胚珠和草本植物、 皮、中果皮去掉，内果皮和种子充分干燥后用锋利的枝 木本植物、非谷类种子及谷物种子的内生细菌，从草本 剪撬开，注意不要伤及种子。种子取出后用70％的酒精 植物中30％的胚乳和15％的种子，木本植物16％的种 浸泡30s，0．1％的升汞消毒3．5min，无菌水清洗3次后 子，5。4％的过冬保存的非谷类种子和13．5％的过冬保 吸于表面水分，将种子置于装有适量MS培养基的三角 存的谷物种子内都分离到了细菌。 瓶中，于25℃光照培养箱内培养。待苗高3cm左右时， 植物内生细菌的研究多以农作物为主，树木内生细 将同一株实生苗上的侧芽剪下，插入新