猪瘟正向间接血凝试验的改进与应用研究.pdfVIP

猪的传染病 结果表明IDEXX试剂盒的判定是准确的，在本试剂盒出现的四份假阳性结果可能由于ELlSA 抗原未经纯化，含有一定量小牛血清，而血清中含有疫苗免疫佐剂的BsA抗体。尽管如此． 本试剂盒与IDExx试剂盒仍表现出较高的整体符台率。在抗原包被板保存期实验中，测定 结果显示：OD值低的阳性血清和处于可疑区间的血清OD值的降低易导致判定结果改变，对 于较高OD值的阳性血清和较低OD值的阴性血清，随保存时间延长，判定结果不易发生变化： 结果中最后两份血清在第五个月测定时oD值相比第四个月有所升高，判定结果与保存0月时 一致，说明操作的偶然误差对于可疑血清的结果判定有一定的影响。在影响EusA反应结果 的诸多因素中，包被在抗原板上的检测抗原稳定性是至关重要的。蛋白质结构发生变化的原 因很多，如溶液的pH值、盐分和糖分浓度、微生物的作用等pJ。这些不利因素可能使蛋白 结构发生变化并进而使得抗原抗体之间的亲和力发生变化。在本研究的过程中我们发现包被 并封闭好的抗原板在室温晾干的过程中阳性标准血清的OD值急剧下降，在4℃条件下也只能 存放一周，其原因可能是抗原被微生物降解或抗原结构的改变而发生活性降低。本研究针对 这种情况，在抗原板封闭后再以蛋白稳定剂进行处理．研究表明，处理后的抗原板在室温可 保存一周以上．在4℃条件下可保存五个月以上。保证了试剂盒的保存稳定性。 参考文献略 猪瘟正向间接血凝试验的改进与应用 李卫李树喜 (中困农业科学陇兰州善匡研究所甘肃兰州730046) 猪瘟兔化弱毒细胞培养物经适当稀释后。致敏处理的绵羊红细胞制各猪瘟血凝抗原，用 于检测猪瘟疫苗免疫动物血清中的猪瘟抗体效价称为猪瘟正向间接血凝试验也称为猪瘟间 接血凝试验(HCIHA)。 早在上世纪60年代中期．农业部成都生物药械厂猪瘟疫苗车间的科技人员就己试制出 检测猪瘟疫苗免疫抗体的间接血凝抗原，并在当地和重庆等地广泛应用。 我们于1988年申请到中国农业科学院‘研制同步检测猪瘟口蹄疫和猪水泡病免疫抗体 试剂》的项目。在参考制备动物传染病寄生虫病间接血凝抗原的基础上，对猪瘟病毒的处理， 绵羊红细胞的处理，猪瘟阳性血清的制各等方面进行了一些改进，使之更具有实用性。 1猪瘟间接血凝试验方法 1．1试剂 猪瘟间接血凝抗原 5m愧 4℃保存(切勿冻结) 猪瘟阳性对照血清 1ml，瓶 一20℃冻结保存 猪瘟阴性对照血清 lml，瓶 一20℃冻结保存 猪瘟专用稀释液 100洲瓶 4℃保存或冻结保存 0．5～1．0 56℃水浴灭活30分钟 待检血清 ml，头份 1．2器具 可调试微量移液器(枪)及配套取液塑咀(头)，96孔V型110。有机玻璃医用微量血 凝板微量振荡器。 1．3操作 1．3．1加稀释裹 微升。 1．3．2稀释待检血清 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十=次学术研讨会 取l号待检血清50徽升加入第1排第l孔。并将塑咀插入飘。底，右手姆指轻压弹簧1．2 次混匀，从该孔取出50微升移入第2孔。混匀后取出50徽升移入第3孔……直至第9孔 混匀后从该孔取出50微升丢弃。此时第l排1．9孔待检血清的稀释倍数依次为l：2口1：4口 1：8口l：16口l：32口l：64口1：128口l：256口l：512口． 取2号待检血清加入第2排第1孔t取3号待检血清加入第3排第l孔……均按上法 稀释，注意!每取l份血清必须更换塑咀。 1．3_3稀释阴性对照血清 在血凝板第7排第l孔加阴性血清50微升，对倍稀释至第3孔，混匀后从该孔取出50 微升丢弃。此时阴性对照血清的稀释倍数依次为l：2口l：4口1：8口：第5．6孔为稀释液对照。 1．3．4稀释阳性对照血清 在血凝板的第8排第l孔加入阳性血清50微升，对倍稀释至第12孔，混匀后从该孔取 出50微升丢弃。此时阳性血清的稀释倍数依次为I：2～l：4096。 10．s加血凝抗原 被检血清各孔；阴性对照血清各孔；阳性对照善孔和稀释液对照各孔加血凝抗原25微 升(充分摇匀，