2.5酶类药物.pptVIP

目 录 目 录 第 五 节 酶类药物 酶的概念 目前将生物催化剂分为两类 酶 、 核酶（脱氧核酶） 酶是一类由活细胞产生的，对其特异底物具有高效催化作用的蛋白质。 第一节 药用酶分类及应用 早期酶制剂主要用于治疗消化道疾病，烧伤及感染引起的炎症疾病，现在国内外己广泛应用于多种疾病的治疗，其制剂品种已超过700余种。 第一节 药用酶分类及应用???? 按其对疾病的防治，可将酶类药物分为以下几个方面。 （一）促进消化酶类 ?（二）消炎酶类 ?（三）治疗心脑血管疾病有关的酶类 （四）抗肿瘤的酶 （五）其它药用酶 (一) 促进消化酶类 利用酶作为消化促进剂，改善胃肠道功能早已为人们所采用。这类酶的作用是水解和消化食物中的各种成分，如蛋白质，脂质类和糖类。 胰酶、纤维素酶、淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶 （二）消炎酶类 蛋白酶作为消炎剂使用最初是在1952年由Znnerfield用胰蛋白酶静脉注射，治疗静脉血栓取得成功的。当时是想用胰蛋白酶溶解血栓，但进行了种种试验后，却发现对炎症有作用，以后蛋白酶便作为消炎剂而应用了。 蛋白水解酶 多糖水解酶 核酸水解酶 消炎作用表现 加强体内组织的通透性 消除蛋白浮肿 消除炎症 （四）抗肿瘤的酶 酶能治疗某些肿瘤， 天冬酰胺酶，它是利用该酶选择性地消耗某些类型瘤组织的营养成分，而正常细胞能自身合成天冬酰胺酶故不受影响。天冬酰胺酶能治疗多种白血病和实体瘤。 神经氨酸苷酶是一种良好的肿瘤免疫治疗剂。 尿激酶可用于加强抗癌药物如丝裂霉素C的药效 米曲溶栓酶也能治疗白血病和肿瘤。 （五）其他酶类 细胞色素C、SOD、过氧化物酶等 参与生物的氧化还原代谢，在抗衰老、辐射、消炎方面也有疗效。 治疗青霉素引起过敏反应的青霉素酶； 分解粘多糖的玻璃酸酶； 预防龋齿的葡聚糖酶 治疗与血管收缩有关循环障碍的激肽释放酶。 ?二 药用酶的制备方法 ?直接提取法 微生物发酵法 动植物细胞培养法 天然提取酶原料的选择要点 不同原料酶含量的差异（0.0001%~1%） 不同生长发育情况及生理状态 简单、易得 取材迅速 从动物或植物中提取酶受到原料的限制，随着酶应用日益广泛和需求量的增加，工业生产的重点已逐渐转向微生物。用微生物发酵法生产药用酶，不受季节、气候和地域的限制，生产周期短，产量高，成本低，能大规模生产。 微生物酶制剂高产菌株的选育 自然界筛选 人工诱变 基因工程育种 酶类药物的提取和纯化 生化提取工艺 生物原料 预处理 提取 纯化 一、生物材料的预处理 （一）动物材料的预处理 1、机械处理 用绞肉机绞，一般细胞并不破碎 。有的酶必须细胞破碎后才能有效地提取，在实验室常用的是玻璃匀浆器和组织捣碎器。 2、反复冻融 冷到-10℃左右，再缓慢溶解至室温，如此反复多次。由于细胞中冰晶的形成，及剩下液体中盐浓度的增高，能使细胞中颗粒及整个细胞破碎，从而使某些酶释放出来。 3、丙酮粉 组织经丙酮迅速脱水干燥制成丙酮粉，不仅可减少酶的变性，同时因细胞结构成份的破碎使蛋白质与脂质结合的某些化学键打开，促使某些结合酶释放到溶液中。 常用的方法是将组织糜或匀浆悬浮于0.0lmol／L，pH6.5的磷酸缓冲液中，在0℃下一边搅拌，一边徐徐倒入10倍体积的-15℃无水丙酮内，10分钟后，离心过滤取其沉淀物，反复用冷丙酮洗几次，真空干燥即得丙酮粉。丙酮粉在低温下可保存数年。 （二）微生物的预处理 要是酶是胞外酶，则可除去菌体后再直接从发酵液中吸附提取酶。但对胞内酶则需将菌体细胞破壁，制成无细胞的悬液后再行提取。 菌体用生理盐水洗涤除去培养基后，应深冻保存。 （三）酶的提取 1、水溶液法 常用稀盐溶液或缓冲液提取。一般在低温下操作。 盐浓度一般以等渗为好，相当于0.15mol／L NaCl的离子强度是最适宜于酶的提取。 2、有机溶剂法 某些结合酶如微粒体和线粒体膜的酶，由于和脂质牢固结合，为此必须除去结合的脂质，且不能使酶变性，最常用的有机溶剂是丁醇。 3、表面活性剂法 表面活性剂能与蛋白质结含而分散在溶液中，故可用于提取结合酶。 （四）酶的纯化 评价纯化工艺主要看二个指标，一是酶比活，二是总活力回收。 酶活力：酶催化化学反应的能力。 活力单位：特定条件下酶促反应在单位时间内生成一定量的产物或消耗一定数量的底物所需要的酶量。 酶活性测定的主要指标：活力单位 国际单位(U)：在特定条件下，每分钟催化1μmol底物转化为产物所需要的酶量为1 U.