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实验五 2,6-二氯酚靛酚滴定法测定L-抗坏血酸的含量 生化分析实验 一、目的 掌握滴定法测定Vc含量的基本原理和操作。 * 二、原理 还原型Vc能与氧化剂染料2,6-二氯酚靛酚作用，染料本身被还原成无色的衍生物，同时还原态的Vc被氧化成脱氢Vc。 氧化型2，6-二氯酚靛酚 （弱碱性，蓝色） 还原型VC 氧化型VC * 还原型2，6-二氯酚靛酚 （弱酸性，无色） 氧化型染料 （弱酸性，红色） H+ H+ VC 滴定法 ??在滴定管中弱碱性的2，6-二氯酚靛酚染料是蓝色的。 染料滴入锥形瓶中，草酸使染料变成弱酸性，再与VC作用被还原成无色。 随着染料用量增加， VC还原能力下降，直到终点，溶液由无色?红色。 染料滴定消耗的量与瓶中的VC浓度成正比。 规定：三角瓶中，由无色变为微红色，15秒钟内不消失，是滴定终点。 * 注意 1.操作要尽可能快，并防止与铁铜器具接触，以减少VC的氧化。 2.样品提取液避免强光直射。 3. 草酸具有抑制氧化酶，保护VC作用。草酸在颜色反应中还提供了酸性条件。 补充 样品有颜色时，测定前添加2～3mL二氯乙烷萃取VC。在滴定过程中当二氯乙烷由无色变为粉红色时，即达终点。 * 三、实验材料及设备 1.材料 新鲜黄瓜 2.仪器 电子天平 3.器材 碱式滴定管： 25mL×1 移 液 管： 20mL×1 容 量 瓶： 100mL×1 量 筒： 100mL×1 锥 形 瓶： 100mL×5 研钵、漏斗：各1 * 五、操作步骤 1.样品液的制备 （1）取材：称取新鲜黄瓜肉10g，固体草酸2.0g，一同放入小纱布中，扎紧口。 （2）研磨：研钵中加点水，用锤子压出汁。 （3）转移：用漏斗转移汁到100mL容量瓶。 （4）残渣提取：残渣再加点水浸泡，锤子压汁，汁并入容量瓶中。重复4次。弃渣滓。纱布清洗干净，留下一班使用。 （5）定容：用水定容至100mL 。 * 修改 2.草酸溶液的配置 ①每组自配2%的草酸液100mL。 ②空白滴定：取20ml草酸液放入100mL三角瓶中，用2,6-二氯酚靛酚滴定至终点（锥形瓶中出现粉红色在15秒内不消失为止 ），记录染料消耗量V0 =？。 * * 3、样品的测定 吸取待测样液20mL，放入锥形瓶中， 立即用2,6-二氯酚靛酚溶液滴定至终点。 记录滴定液体积。 平行操作三次，取平均值。 Vm=（V1+V2+V3）×1/3 样品VC消耗的体积Vn=Vm-V0 4、 标定 ①配制：每班选代表2人，配制2%草酸溶液1000mL。 另选2人，参照Vc=20mg剂量称取，精确记录本班G=？。 用2%草酸溶解标准Vc至1000mL。 ②计算：本班配制的标准VC实际浓度=？ ③ 滴定：各组取标准Vc液20mL，放入“标定” 锥形瓶中，用2,6-二氯酚靛酚滴定至终点。 ④记录：标定时染料消耗的毫升数V标定=？。 * 六.结果处理 1.计算K值 K值：1mL染料所能氧化抗坏血酸的mg数。 K= × (mg/mL) 标定 * 公式改了 取20ml滴定 定容1000ml 各班标定，称取Vc的mg数 -V0