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2008，V01．23
Chinese oiRehabilitation，OctoberNo．5
294 Journal
DOI
解偶联蛋白一2RNA干扰慢病毒载体的构建*
万赤丹，程锐，王春友，王宏博，王帅，刘涛
(华中科技大学同济医学院附属协和医院普外科武汉430022)
【摘要】目的：构建解偶联蛋白一2(UCP一2)基因的RNA干扰慢病毒载体。方法：根据RNA干扰序列设计原则，针
表达质粒共转染293T细胞，荧光显微镜下观测转染效果．Westernblot检测UCP-2蛋白表达，筛选出干扰效果最好
2．0(VSVG元件)共
RNA干扰质粒。将该质粒与两种辅助包装原件载体质粒pHelper1．0(gag／pol元件)载体，Helper
转染293T细胞包装成慢病毒并检测滴度。结果：PCR和测序结果显示针对3个靶点的RNA干扰质粒均构建成功；通
过Westernblot检测获得最优干扰靶点，并成功包装成滴度为5×108TU／ml的慢病毒。结论：成功构建可供感染的解
偶联蛋白一2RNA干扰慢病毒载体，为后续靶向抑制该基因表达以提高脂肪肝移植成功率的研究奠定物质基础。
【关键词】解偶联蛋白一2；RNA干扰，慢病毒
【中图分类号】R49；R575．5
ConstructionofRNA Lentivirus WAN
Vector Protein2 Chi—dan，CHENGRui，WANG
Interfering TargetingUncoupling
General Medical
Chuwyou，eta1．Departmentof Surgery，UnionHospital，TongJiCollege，HuazhongUniversityof
Scienceand 430022，China
Technology，Wuhan
constructRNA vector 2
[Abstract]Objective：To interfering(RNAi)lentivirustargetinguncouplingprotein
fromUCP-2mRNA
(UCP一2)．Methods：Threespecifictargetsequences designed
sequence(NM一011671)wereaccording
tOthe ofsiRNA double-strandDNA WaS and
principle design．The containinginterferingsequencedesigned，digested
linkedwith wastransfectedinto ceilsandthecloneswere tOPCRidentifica-
pGCL-GFP．Theproduct competent
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