慢病毒载体介导的CXCR7-shRNA联合重楼总皂苷对胃癌细胞SGC7901特异性靶向干预的实验研究.pdfVIP

论著  基础研究 中国生化药物杂志  2014年第2期 总第34卷 慢病毒载体介导的 CXCR 7-shRNA 联合重楼总皂苷对胃癌细胞 SGC 7901 特异性靶向干预的实验研究 1,2 3 3 3△ 赵东文 ，李谌 ，王海龙 ，陆航 （1.辽宁医学院 辽宁 锦州 121001；2.瓦房店市中心医院 普外科 辽宁 瓦房店 116300；3.辽宁医学院 附属第一医院 普外科, 辽宁 锦州 121001） [摘要] 目的 方法 探讨慢病毒介导的CXCR 7-shRNA 转染人胃癌细胞株 SGC 7901后重楼总皂苷干预对 CXCR7 蛋白表达的影响。 设计并合成 CXCR7 的3 条 shRNA 序列及 1条阴性对照序列，与 pSilencerTM 4.1 系统合成构建重组慢病毒载体，转染 HEK 293 T 细胞包装病毒并检测滴度；将 3 种重组慢病毒载体 及阴性对照分别感染人胃癌细胞 SGC 7901，RT-PCR 检测用药前后 CXCR 7 mRNA 的表达情况，测定沉默效率，筛选沉默效率最高的一组 CXCR 7-shRNA 作为后续 实验表达载体；MTT 法检测转染 CXCR 7-shRNA 对 SGC 7901细胞的增殖的影响以及重楼总皂苷干预后的影响；Western blot 检测转染 CXCR 7-shRNA 后 SGC 7901细 结果 8 8 胞蛋白表达情况以及重楼总皂苷干预的影响。 测序证实 3 种慢病毒载体及 1组阴性对照载体均包装成功，滴度分别 4.9×10 pfu/mL、3.6×10 pfu/mL、 8 8 5.2 ×10 pfu/mL 和 2.0 ×10 pfu/mL；3 组慢病毒载体转染 SGC 7901细胞后，CXCR 7 mRNA 的表达量均较阴性对照组显著降低（＜0.05），其中CXCR 7-shRNA-1 P 组和重楼总皂苷组对 CXCR7 的抑制率显著高于其他 2 组（＜0.05）；CXCR 7-shRNA-1 转染 SGC 7901后，肿瘤细胞的生长增殖显著下降，与其他组相比有显著 P 结论 性差异（＜0.05）；CXCR 7-shRNA-1 转染 SGC 7901后，与空病毒载体组、空白组相比，CXCR 7 蛋白表达量显著降低（＜0.05）。 成功构建了3 种 CXCR 7- P