棉花纤维发育相关基因的分离鉴定及功能分析研究.pdfVIP

摘 要 棉花纤维是研究植物细胞伸长及细胞壁合成的理想体系。虽然近些年来，在 棉花纤维发育相关基因的研究方面取得了很大的进展，但对于调节棉纤维发育的 关键基因目前为止还知之甚少。本论文分离、鉴定、并初步研究了两个棉纤维 特异表达的基因。 首先以陆地棉 (Gossypiumhirsutum)纤维发育前期和中期的胚珠及纤维细 胞为材料构建cDNA文库，通过ESTs分析获得了一个p-tubulin家族成员 (GhTub1).以该。DNA的3-UTR为探针，利用Northern杂交方法，对GhTub1 基因在棉花不同器官及棉纤维不同发育阶段的表达进行了分析，发现该基因的 表达具有棉纤维细胞特异性.在纤维发育过程中，GhTubl转录产物的累积则主 要发生在纤维细胞延伸阶段，在纤维延伸速度最快时达到高峰.利用裂殖酵母系 统，对GhTubl的细胞内功能进行了初步分析，发现该基因在酵母中过量表达能 使其细胞显著伸长或分枝.这些实验结果暗示GhTubl基因可能在纤维细胞的极 性延伸中具有功能. 利用FDD(fluorescencedifferentialdisplay)方法分离得到一个类受体蛋白 激酶基因 (GhRLK1),Northern杂交分析表明GhRLKI在棉纤维中特异表达， 从纤维细胞停止伸长，次生壁开始大量合成的过渡时期起始表达，在次生壁合成 最活跃时达到高峰。通过细胞定位研究发现该基因定位于细胞质膜。激酶活性分 析表明 GhRLKI具有丝/苏氨酸和酪氨酸激酶双重活性。利用 Northern分析 GhRLK]在棉纤维长度不同的两个棉花品种 (24DPA的纤维)中的表达情况， 结果表明GhRLKI在短纤维品种中的表达量远高于它在长纤维品种中的表达量。 另外，在裂殖酵母中大量表达GhRLKI，可以使酵母细胞的极性伸长受到明显抑 制。这些实验结果暗示GhRLKJ可能在纤维伸长后期以及次生壁合成期的信号传 导途径中起重要作用。 关键词 棉花纤维 发育 微管蛋白类受体蛋白激酶 信号传导 Abstract Cottonfiberisanidealmodelforstudyingplantcellelongationnadcellwallbiogenesis, butthegenesthatarecriticalfortheregulationoffiberdevelopmentarelargelyunknown.Inthis thesisweseparatedandidentifiedtwogenesexpressedspecificallyincottonfibercells,and investigatepreliminarytheirfunctions AcDNAlibrarywasconstructedusingpoly(A犷RNAisolatedfrom-1一15DPAfibersof uplandcotton(Gossypiumhirsurum).ThecDNAencodingap-tubulinisoform(designatedas GhTubI)wasidentifiedthroughESTsearch.Northernblotnaalysisusing3-UTRofthecDNAas agene-specificprobewasperformedtoinvestigatetheexpressionlevelsofGhTublinvarious organsnadinthedevelopingfibers.TheresultsshowedthatGhTublgenewasspecifically expressedincottonfibercells.Duringfiberdevelopment,GhTubltranscriptsaccumulatedhighly atthestageofcellrapidelongationwiththehighestexpressionappearingatthetimewhenfiber expnasionreachesthepeakrate.ToprobetheinvivofunctionofGhTubl,itscDNAwasclonedin theyeastexpressionvectorpREPIandtransformedintothefissionyeastSchizosaccharomyce