棉铃虫三氟氯氰菊酯抗性品系及其同源对照品系神经细胞培养和神经节细胞学特征分析研究.pdfVIP

!里些三兰垒查堑主、业重星垒兰±堡生叁丝苎生——卫 棉铃虫三氟氯氰菊酯抗性品系及其同源对照品系 神经细胞培养和神经节细胞学特征分析+ 贺秉军刘安西陈家童孙金生 王秀玲郭世宜 (南开大学生物系天津300071) (南开大学生科院电镜室天津300071) 芮昌辉赵建周 伸国农业科学院植物保护研究所北京100094) 摘要：本文对棉铃虫三氟氯氰菊酯抗性品系及其同源对照品系幼虫神经细胞离体生长条件进行了探索，并 对比分析了神经节的细胞学特征。棉铃虫幼虫神经细胞在增补幼虫血淋巴的Tc·100培养基中可维持存活 5．7天。培养基中不加血淋巴，而增补谷氨酰胺时．细胞也可贴壁生长，但接种24小时后出现老化现象t 表现为空泡增多．甚至脱落．增补适量葡萄糖后，细胞可维持较长存活时间(22-28天)·细胞在pH值6．4· 7．0范国内均可存活．最适口H值为6．4。除少数神经细胞有1或2条突起外，大多数(90％)细胞具多条突 起，与在体生长有明显区别。棉铃虫抗性种群、对照种群、同种群不同龄期幼虫以及同一个体胸、腹神经 节的神经细胞在体外培养时在形态等方面无明显差异，但抗性品系幼虫运动神经元内线粒体明显增多t同 时神经围鞘与神经节膜厚度之比明显增加。 关键词：棉铃虫；神经细胞；细胞培养：超微结构；抗性 引言 剂产生了严重抗性。直接以神经细胞为研究对象，分析特定药物对细胞膜受体及膜离子通 道的作用，必将加速药物作用机理和害虫抗药性机制的研究进程，为药物筛选和害虫抗药 经细胞体外培养的报道。 昆虫神经元胞体主要分布在神经节内部周缘，但杀虫剂进入血淋巴后，必须穿过神经 cell)联结形成的层层屏障才 节膜(neurallamella)、神经围鞘(perineurium)及胶质细胞(glial 能作用于神经细胞。因此，若神经细胞外的保护层发生变化，也有可能提高害虫抗药性。 (s)幼虫神经细胞进行了离体培养，并对二者腹神经节超微结构进行了对比分析，以期对棉 铃虫抗药性机理研究有所裨益。 l材料和方法 1．1试虫 棉铃虫初始种群于1992年8月采自河北保定棉田，将一部分在室内用一定浓度三氟氯 氰菊酯连续点滴处理40次进行抗性汰选，保持每个汰选世代的死亡率为60-80％，获三氟 u 氯氰菊酯抗性品系．LD。为0．4903g，头：另一部分不用药剂处理，室内连续饲养，获同 源对照品系，LD，。为0．00419 S4)幼虫。抗性种群及对照种群均由中国农业科学院植物保护研究所提供。 1,2培养基与消化液 H／mL庆大霉素，0．9．1．2％棉铃虫幼虫血淋巴(5龄幼虫， 胺，0．6．0．8mg／ml谷胱甘肽，80 22 urn微孔滤膜过滤，．20C冷冻保存备用)，pH6．6。 5，D．Mannitol 98，KCI 10，G|ucose ，L1NaCl 6，Hepes 137，pH6．6。(据Lee改变而成)。 72 中国化工学会农药专业委员会第十届年会论文集 1．3神经细胞的分离培养 棉铃虫幼虫饥饿48小时左右，75％乙醇体表消毒3次，每次2-3min，无菌条件一F生 90，KCI 50，D。Mannitol 14，CaCl22，MgCl22tHepeslO，G1ucose 理盐水(mmol／L)(NaCl 6．6据Lee、Bindoka等改变而成)漂洗3次。小心剔除消化道及气管等组织，分离 92，pH nerve 出中枢神经索(centralcord)。 神经索用生理盐水漂洗2次，消化酶液中孵育15min后用解剖针撕裂神经节外的神经 鞘，继续振动孵