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高效毛细管电泳技术 中国科技大学生命科学实验中心　施荣华电话 3607433 邮箱 rhsh@ustc.edu.cn 前 言 电泳 带电物质在电场中的泳动 毛细管电泳 被分离物质在毛细管中的电泳 高效毛细管电泳 高效率高度自动化的毛细管电泳 高效毛细管电泳 ( high performance capillary electrophoresis, HPCE ) 作为90年代最重要的分离分析手段之一，HPCE是当今分析化学和分析生物化学的公认前沿。HPCE技术的诞生象征着人类开始进入纳米技术时代。其涉及范围包括诸如物理学、化学、电子学、光学、计算机科学等众多学科和领域。 前 言 HPCE的发展历程： ? 1808年俄国物理学家Von Reuss首次发现电泳现象； ? 1937年， 瑞典的蒂塞利乌斯（Tiselius）将电泳发展成为一种分离技术，因对电泳分析和吸附方法的研究，特别是发现了血清蛋白的组分而获得1948年诺贝尔化学奖； ? 1981年Jorgenson和Lukacs发展的现代毛细管电泳技术首次在75微米口径的毛细管内分离氨基酸，理论塔板（表示分离效率的参数）数达到40万；【理论塔板数=5.54(保留时间/半高峰宽)2】 ? 1988年第一台自动化的毛细管电泳仪问世； ? HPCE与其它技术联用：CE-MS、LC-CE、CITP-CE等。 HPCE能做什么？？？ HPCE号称万能分析仪器，可以分离各种不同的样品，包括：肽类、蛋白、核酸、离子、手性化合物和药物。 各种化合物的定量定性分析 分子相互作用 细胞分析 毛细管区带电泳分离多肽混合物： U V： 214nm V： 25KV Buffer: 硼酸盐 PH :6.5 蛋白等电点测定 生物碱标准样品定量 碳酸胺缓冲液:50mmol/L 检测波长（PDA）： 308nm  无涂层毛细管： 50cm电压： 15KV PH :6.8  分子间相互作用的鉴定-------结核相关蛋白与铜离子络合分析下左图,未加铜离子的分离下右图,加铜离子络合后的图谱 毛细管电泳分析Hela细胞，左图为新鲜的细胞，右图为凋亡后的细胞，分离buffer为硼酸和硼砂缓冲液，PH8.0 实物图 HPCE的结构 ? 仪器结构 HPCE的结构 ? 毛细管柱 材料：要求1化学、电学惰性,2导(散)热性强，3紫外-可见光透光性，4柔韧性，高强度，价廉。常用材料为熔融石英，外层涂聚酰亚胺； 新材料有聚四氟乙烯(散热性不好)。 内径：25 —75?m 外径：350 — 400?m 长度：50cm左右 1、 内可容纳毛细管的制冷剂管道 2、 毛细管 3、 UV 和PDA检测窗口 4、 LIF 检测窗口 部件二：检测系统 检测原理： 1 利用化合物对紫外光有吸收，将吸收光信号变为电信号传送给计算机，由计算机制作成电泳图而被分析 2 利用化合物对特定发射光具有吸收而产生激发光，由激光诱导荧光检测器完成。 检测器选择 紫外/可见光检测测器（UV/VIS） 二极管阵列检测器（DAD) 激光诱导荧光检测器(LIF) HPCE的结构 ? 进样系统 流体力学方式：进样端加压、毛细管的出口抽真空、利 用虹吸现象。进样量不受样品基质的影 响。一般进样长度不超过有效长度的1% 电 动 方 式： 用样品换缓冲液并加电压（分离场强的 1/3— 1/5）。对离子型组分有进样歧视 . (正负离子不一样)但适合于粘性介质或 凝胶电泳时使用。 HPCE的结构 ? 高压系统 HPCE采用高电压（10—30kV）加在毛细管两端以 产生高电场强度（100—500V/cm）。加大电压可缩短电 泳时间，提高分离度，使峰形变窄。 HPCE的结构 HPCE的分离模式 ? 毛细管区带电泳（capillary zone electrophoresis, CZE） ? 胶束电动色谱（micellar electrokinetic chroma