仪器分析-毛细管电泳的基本理论.pptVIP

EXPLORER 毛细管电泳（CE） 毛细管电泳（CE）分离 毛细管电泳基本结构图 电泳 毛细管电泳在蛋白质分析的应用 电泳 电泳 　在电解质溶液中，位于电场中的带电离子在电场力的作用下，以不同的速度向其所带电荷相反的电极方向迁移的现象，称之为电泳。　 带电悬浮颗粒或大分子在一定介质中因电场作用而发生移位运动的物理化学现象。 颗粒或大分子的迁移速率取决于电势差、颗粒带电量和颗粒大小、形状。 1937年瑞典化学家Tiselius蒂塞利乌斯运用电泳成功分离血清蛋白，获得1948年诺贝尔化学奖，开创了电泳技术的新纪元。 利用电泳现象对某些化学或生物物质进行分离分析的方法和技术叫电泳法或电泳技术。 按形状分类：U型管电泳、柱状电泳、板电泳； 按载体分类：滤纸电泳、琼脂电泳、聚丙烯酰胺电泳、自由电泳； 传统电泳分析：操作烦琐，分离效率低，定量困难，无法与其他分析相比。 1981年，Jorgenson和Luckas，用75μm内径石英毛细管进行电泳分析，柱效高达40万/m，促进电泳技术发生了根本变革，迅速发展成为可与GC、HPLC相媲美的崭新的分离分析技术——毛细管电泳。 以毛细管为分离通道，高压直流电场为驱动力的新型液相分析技术。 可将有生物化学意义的复杂化合物在不改变其性质的前提下进行分离． 应用：蛋白质分离、糖分析、DNA测序、手性分离、单细胞分离。 CE分离原理 毛细管电泳是基于溶质在电场力的作用下，在装有电泳介质的毛细管中的迁移速度不同而进行分离的。 电泳迁移：在高压电场下，带电离子向相反的方向移动。 电渗迁移：当毛细管内充满缓冲溶液时，毛细管壁上的硅羟基发生解离，生成氢离子溶解在溶液中，这样就使毛细管壁带上负电荷与溶液形成双电层，在毛细管的两端加上直流电场后，带正电的溶液就会整体的向负极端移动，这就形成了电渗流。 在操作缓冲溶液中，带电粒子的运动速度等于电泳速度和电渗速度的矢量和，电渗速度一般大于电泳速度，因此即使是阴离子也会从阳极端流向阴极端。 分子量的测定 等电点的测定 肽谱分析（指纹图）测定蛋白质的一级结构 迁移率的测定 等电点的测定原理 蛋白质有特定的氨基酸组成,因此有特定的等电点pI,是一种物化常数.各种蛋白质的等电点可以分布在很宽的范围,低者可达pH1.5,高者可超过pH12,以此在PH介质梯度用于蛋白质的分离和鉴定. 常用的有蛋白质的等电聚焦,和分子量测定类似,用标准工作曲线法. 标准曲线法 先测出标准蛋白，如左图显示了由214nm紫外吸收检测得到的谱图，由此可以求算出如下图分子量－迁移时间工作曲线图或计算出回归曲线方程 再测未样品的tR ，然后在工作曲线下进行标准比较． 谢谢观看