小RNA干扰DDR2基因表达对肝星状细胞的影响.pdfVIP

-748· ·论著． 小RNA干扰DDR2基因表达对 肝星状细胞的影响 张广林罗蒙孙勇伟徐庆陈炜 domain 【摘要】 目的探讨siRNA干扰大鼠盘状结构域受体2(discoidinreceptor2，DDB2)基因 stellate 对肝星状细胞(hepaticcell，HSC)的影响。评估DDR2在肝纤维化发生中的作用。方法 (1)化学合成3对针对DDR2基因的siRNAs，转染肝星状细胞株(HSC一36)，筛选抑制效率最高的 siRNA用于干扰实验；(2)将肝星状细胞株HSC-T6分为3组：正常组(normal，N组)、阴性对照组 control，NC组)和干扰组(siRNA-DDR2，SI组)。将筛选的抑制效率最高的siRNA以脂质 (negative muscle 体法转染HSC-T6细胞株，以RT·PCR检测其DDR2，a·平滑肌肌动蛋白(at—smoothactin，d- SMA)和I型胶原(collagen·I)的mRNA表达，Westernblot检测DDR2蛋白表达变化；同时四唑盐 (MTr)法检测细胞增殖情况。结果(1)868位点的siRNA抑制效率最高；(2)与正常组相比， DDR2蛋白的表达亦显著降低(t=4．49，P0．01)，同时HSC的增殖能力也显著降低(t=18．32，P 0．01)；相反，阴性对照组与正常组相比，DDR2、n-SMA的mRNA表达以及DDR2蛋白和HSC的增殖 能力则无明显改变。结论siRNA—DDR2能显著抑制HSC的活化与增殖，进而抑制纤维化发生，具 有潜在的抗纤维化作用。 【关键词】RNA干扰；盘状结构域受体2；肝星状细胞；肝硬化 EffectsofsiRNA DDR2OH stellatecellsZHANG targeting hepatic Guang-lin，￡∞Meng， SUN General yo增一wei，xuQing，CHEN耽i．Departmentof Surgery，Re够Hospital，鼬彻曲面jiao％昭 School 200127，China UniversityofMedcine，Shanghai author：LUO CorrespondingMeng，E．mail：luoty@hotmail．tom To theeffectsof DDR2 siRNAon by 【Abstract】Objectiveexplore inhibitingexpression hepatic stellatecells theroleofDDR2 in Methotis of andevaluate (1)Three genehepaticfibrogenesis． pairs DDR2 transfectedintoHSC邙6ceHsforevaluation syntllesizedsiRNAstargetingwere chemically respectively mosteffectivesiRNAWas cellsweredividedintotII瑚 ofsilence the used．(2)HSC-T6 ettlcacy。and Aserved舾normal B