小分子干扰RNA对斑马鱼VEGF基因的沉默作用.pdfVIP

高技术通讯 年 月 第 卷 第 期 2007 12 17 12 小分子干扰RNA 对斑马鱼VEGF 基因的沉默作用! 杨少丽! !!!!!! 郑兰红!!!! 阎松!!!! 王征!!!! 林秀坤 ! ! （中国科学院海洋研究所实验海洋生物学重点实验室 青岛266071） !! （ 中国科学院烟台海岸带可持续发展研究所 烟台264003） !!! （ 中国科学院研究生院 北京 100039 ） !!!! （ 大连交通大学环境与化学工程学院 大连 116028） 摘 要 运用 干扰技术，针对斑马鱼血管内皮生长因子（ ）基因设计并合成了 RNA VEGF 特异性小分子干扰 （ ），并从血管形成水平研究了 对 基因表达的影 RNA siRNA siRNA VEGF 响。为了得到能在体内稳定表达的siRNA，进一步以psiIencer 4 . 1-CMV Vector 为载体，合 成了短发夹 （ ）表达模板并定向克隆到 启动子下游，构建了 表达载 RNA shRNA CMV shRNA 体。定量碱性磷酸酶染色显示注射合成的 后胚胎新血管生成（ ）为 siRNA angiogenesis 71. 8% ， 血管染色显示表达载体可以引起斑马鱼胚胎肠下静脉、节间血管发育缺 NBT/ BCIP 陷，原位杂交结果显示胚胎头部及前原肾管部位VEGF 表达异常。 关键词 干扰，斑马鱼，血管形成， 基因 RNA VEGF NA 的降解从而导致基因沉默的现象。由于dsRNA 0 引 言 能够特异、高效地缄默靶基因的表达，因此 dsRNA 血管内皮生长因子（ 在线虫、果蝇等低等生物和某些植物中得到了广泛 vascuIar endotheIiaI growth ［］ 7 factor， ）是一种多功能的细胞因子，其主要作用 的应用 。然而在大多数哺乳动物细胞中，转染长 VEGF 是促进血管内皮细胞增殖和增加血管通透性，而促 于30 个核苷酸的dsRNA 会激活抗病毒的干扰途径 ［］ 进血管内皮细胞增