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慢病毒载体的构建及体外对
树突状细胞的作用
顾晓冬 洪 军 项建斌6 陈宗祜
(复旦大学附属华山医院普外科上海200040)
【摘要1 目的 构建小鼠CD80和CD86基因RNA干扰慢病毒表达载体，并在体外观察其对小鼠骨髓源性树突
状细胞(dendritic
体外培养的DC，通过荧光显微镜检测感染效率．Anne虹nV／PI双染色法检测感染细胞凋亡和坏死情况，流式细
胞仪检测cD80和CD86的表达情况。结果 shRNA慢
PCR和测序证实，pGCL-cD80shRNA和pGCL．CD86
病毒载体构建正确，病毒滴度均达2×107TU／mL，适合感染Ⅸ：的MOI值为20。此时慢病毒对DC具有低毒
性。感染效率为85．42％。CD8【)和CD86表达的抑制率分别为82．05％和77．78％。结论成功构建出小鼠
了新的治疗手段。
【关键词】慢病毒； CD80；CD86；RNA干扰；树突状细胞
【中图分类号】R392．4 【文献标识码】A
ConstructionoflentiViralVectors mouseCD80andCD86
targeting genes
RNAinterferenceandtheireffectsondendriticcellsZ力yZfro
by
GU
Xiao-dong，HONGJun，XIANGJian-bin△，CHENZong—you
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Toconstructlenti、，iral mouseCD8()and RNA
【Abstr越t】objective vectors CD86
targeting genesby
interferenceandto theireffectsonbornenlarro、^，-denveddendriticcens(亡，c)f门讲f，．o．Metho【IsThe
study
effective ofsiRNA CD80 wasconfirmedinour The
sequence targetinggene previousexperiment．
DNA and
bothsenseantisense ofthe was
complementarycontaining oligonucleotidestargetingsequence
After annealed，thedouble—strandedDNAwasinsertedintothe
designed，synthesized．being pGCL-
GFPvector．The lentiviralvectorwas
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