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陕西医学杂志 年 月第 卷第 期
０１３ ３ ２
２ ４ ３ ２５９
·论著 ·基础研究 ·
小鼠Ｍｍｐ９ｓｈＲＮＡ重组慢病毒包装、筛选及干扰效果检测
第四军医大学西京医院整形科（西安 ） 张冠华 易成刚 马戈甲 杨 力△
１００３２
７
小 （ ， ）
摘 要 目的：设计、筛选、构建并鉴定 ｍ ９ 干扰 ＮＡ ｓｍａｌｌｉｎｔｅｒｆｅｒｉｎ ＲＮＡ ｓｉＲＮＡ ，
Ｍ Ｒ
ｐ ｇ
并构建其慢病毒表达载体，为血管化疾病的防治提供理论依据及实验室数据。方法：针对基质金属
蛋白酶 靶基因设计 序列，并合成小发卡 （ ， ）结构的 ，
ｉＲＮＡ ＮＡ ｓｈｏｒｔｈａｉｒｉｎＲＮＡ ｓｈＲＮＡ ＮＡ
９ ｓ Ｒ ｐ Ｄ
与经 和 酶切的 连接、转化大肠杆菌感受态细胞，构建成携带
ｃｏＲ ＩＬＲＦＰ ｍ ９ｓｈＲＮＡ
Ａ ｅ Ｅ Ι Ｓ Ｍ
ｇΙ ｐ ｐ
慢 ／ ） 及 筛选出携带最佳
病毒质粒载体（ ＩＬＲＦＰＭＭＰ９ｓｈＲＮＡ ， ＣＲ 测序鉴定后， ｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ
Ｓ Ｐ Ｗ
ｐ
的慢病毒质粒载体，并利用慢病毒包装质粒（ 和 ）将其制备成
ｓｉＲＮＡ Ｈｅｌｅｒ１．０ Ｈｅｌ ｅｒ２．０
ｐ ｐ ｐ ｐ
慢病毒，并测定病毒滴度 １０ ／。结果： 和 测序证实合成的含
ＭＰ９ｓｈＲＮＡ ×１０ ｕ ｌ ＣＲ ＤＮＡ
Ｍ １ ｆ Ｐ
ｐ
基质金属蛋白酶 短发卡 慢病毒载体寡核苷酸链正确插入 载体，表明实验成功构
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