小分子RNA干扰沉默缺氧诱导因子1α加重缺氧状态肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死.pdfVIP

·530· ·基础研究· 小分子RNA干扰沉默缺氧诱导因子1仪 加重缺氧状态肾小管上皮细胞的 生长抑制和坏死 陈越 蒋素华 朱加明 钟一红 傅辰生 刘红 方艺 丁小强 【摘要】 目的探讨沉默缺氧诱导因子let(HIF—let)对缺氧状态肾小管上皮细胞增殖、 凋亡和坏死的影响。方法利用氯化钻模拟缺氧状态，并应用小分子RNA干扰(siRNA)技 术沉默HIF—lct基因表达。将细胞分成5组，分别是正常培养组、缺氧培养组、转染试剂组、阴 性对照组和HIF—letsiRNA组。用M1Tr试验检测细胞的生长抑制率；用TUNEL法、半胱氨酸天 冬氨酸蛋白酶(aspase)一3蛋白定量法检测细胞的凋亡率；检测细胞上清液中乳酸脱氢酶 (LDH)活力来测定细胞的坏死情况；用实时定量PCR法和Western印迹法检测细胞HIF—lct、 HIF一2et、葡萄糖转运蛋白1(Glut一1)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA和蛋白表达水平。结 果 (1)siRNA的细胞转染效率为95％～100％。在常氧条件下，终浓度100nmol／L的HIF—lct 率达到97％。(2)HIF—letsiRNA组细胞的生长抑制率显著高于其它组(P0．05)；细胞凋亡率 在缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF—letsiRNA组4组问的差异无统计学意义(P 0．05)；HIF一10【siRNA组细胞培养液中LDH水平显著高于缺氧培养组、转染试剂组和阴性对 照组(P0．05)。(3)HIF—let siRNA组细胞的HIF—let、Glut一1、VEGFmRNA和蛋白表达量显著 低于缺氧培养组、转染试剂组、阴性对照组(P0．05)；而HIF一2etmRNA和蛋白表达在缺氧 培养组、转染试剂组、阴性对照组和HIF—letsiRNA组4组间的差异无统计学意义(P 0．05)。结论siRNA沉默HIF—let能显著抑制缺氧状态下肾小管上皮细胞Glut一1和VEGF 表达，加重缺氧状态下肾小管上皮细胞的生长抑制和坏死。 【关键词】 缺氧诱导因子1，仪亚基； RNA干扰；缺氧； 肾小管上皮细胞 induciblefactor-1d necrosis inhibitionand of Hypoxia genesilencingaggravatesgrowth human renaltubular cellunder CHEN NG proximal epithelial hypoxia Yue，JIASu—hua， Yi，DING ZHU五。一ming，ZHONGYi—hong，FUChen—sheng，LIUHong，FANG Xioo—qiang． DepartmentofNephrology，ZhongshanHospital，Fudan 200032，China University，Shanghai author：DING Corresponding Xiao—qiang,Email：dxq93216@medmail．COrn．cn To theeffectof induciblefactor—let 【Abstract】Objectiveexplore by hypoxia silencing siRNAon andnecrosisofhumanrenal proliferation，apoptosis proximalepithelialcell(HK一2) under Methods wasusedtomimic was