小分子干扰RNA干扰RhoGDI2基因表达对结肠癌细胞凋亡迁移的影响及其机制.pdfVIP

·2000· ·实验研究· 小分子干扰RNA干扰RhoGDl2基因表达 对结肠癌细胞凋亡迁移的影响及其机制 李守峰刘璐伍衡许鹤洋来伟褚忠华 【摘要】 目的探讨小分子干扰RNA(siRNA)干扰RhoGDl2基因的表达对结肠癌细胞株凋亡 侵袭的影响及其机制。方法运用Western blot和实时定量逆转录聚合酶链反应(RT．qPCR)检测结 siRNA 肠癌细胞株LoVo、SW480、CaC02、DLDl、RKO、HT一29的RhoGDl2表达。设计及合成RhoGDl2 干扰序列，通过Lipofectamine“2000转染到筛选细胞，细胞分为干扰组和空白对照、阴性对照组；膜 联蛋白V／碘化丙锭(AnnexinV／PI)双染流式细胞仪检测细胞凋亡率，细胞划痕试验和Transwell实 验检测细胞迁移能力，Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关E一钙黏蛋白(E—cadherin)／波形蛋 白(Vimentin)、Snail转录因子表达水平。结果野生型人结肠癌细胞株RhoGDl2表达量由高到低依 干扰组、阴性对照组、空白对照组细胞凋亡率分别是(2．67±0．97)％、(2．45±0．74)％、(2．35± 0．43)％(P0．05)；干扰组及对照组的细胞划痕24h愈合度分别是90％、50％(P0．05)；Tran— swell实验24h迁移细胞数目：干扰组为55．7±9．5，阴性对照组和空白对照组分别为25．1±8．6、 子表达上调。结论结肠癌RhoGDl2基因沉默可能通过引起EMT促进细胞迁移。 【关键词】小分子干扰RNA；RhoGDl2；结肠癌；上皮间质转化；细胞迁移 EffectsofRhoGDl2 siRNAon andinvasionofcoloncarcinomacelllines genesilencingby apoptosis Gastrointestinal L／Shou母醒，uUh，WUIteng，XUHe-yang，LAIWet，CHUZhong—hua．Departmentof Yat—senMemorial Yat—sen Surgery，Sun Hospital，SunUniversity，Guangzhou510120，吼ina author：勰U Correspondlag Zhong—hua，Emtd{：chu9009@163．coin To theeffectofthe RhoGDl2 small 【Abstract】Objectiveinvestigate silencing geneexpressionby RNA(siRNA)onthe andinvasionofcoloncancercelllines．MethotisWithWest． interfering apoptosis em andreal．timereverse chain blottinganalysis transcription．polymerasereaction(RT—qPCR)。RhoGDl2 ofthecoloncancercelllinesof HT-29was expression LoVo，SW480，CaC02，DLDl，RKO，thedetected． ThesiRNAofRhoGDl2with wastransfectedinto siRNAand LipofectamineTM2000targetcells。comprising control V／PI flow todetect