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短乳杆菌Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306
谷氨酸脱羧酶基因的克隆与表达
范恩宇1 2 1 1 *
，黄俊，胡升，梅乐和
1
(浙江大学材料与化学工程学院，杭州 310027)
2
（浙江科技学院生物与化学工程学院，杭州 310023）
摘要：对本实验室筛选的γ－氨基丁酸（GABA ）高产菌株——短乳杆菌 Lactobacillus brevis
CGMCC NO.1306 的谷氨酸脱羧酶基因（gad ）进行了克隆和表达。经过对引物和PCR 扩增条件
的选择和优化，从提取的 Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306 基因组中克隆得到了长度为
1400bp 的核酸片段。以pET-28a （+ ）为载体，对扩增片段和pET-28a （+ ）进行了BamH Ⅰ和 EcoR
Ⅰ双酶切及连接，经过优化酶切和连接条件，得到了pET-28a （+ ）-gad 表达质粒。连接产物转
化BL21( λDE3) ，经双酶切分析、PCR 克隆和DNA 测序，从卡那霉素抗性平板上的阳性转化子
中得到了表达谷氨酸脱羧酶的基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET28-gad ，所得谷氨酸脱羧酶基因
与Lactobacillus brevis ATCC 367 的gad 有95 ％的同源性，且具有GAD 的保守序列。
关键词：短乳杆菌CGMCC NO.1306 ；谷氨酸脱羧酶；克隆；表达；γ-氨基丁酸
Cloning and Expression of Glutamate Decarboxylase of
Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306
1 2 1 2
FAN En’yu ，HUANG Jun ，HU Sheng ，MEI Lehe
1
( Institute of Bioengineering ，Zhejiang University ，Hangzhou 310027 ，Zhejiang ，China；
2 School of Biological and Chemical Engineering ，Zhejiang University of Science and Technology ，
Hangzhou 310023 ，Zhejiang ，China)
Abstract ：Glutamate decarboxylase (GAD) which catalyzes glutamate into Gamma-aminobutyric
acid (GABA) is a kind of important decarboxylase. Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306 breeds
by our team exhibits excellent GABA yields of up to 74.6 g/L. In this study, the GAD gene of
Lactobacillus brevis CGMCC NO.1306 was cloned and expressed in E.coli in order to facilitate
the GABA preparation as well as research and applica
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