青霉菌产漆酶条件及酶学性质的研究.pdfVIP

第 l4卷 第4期 2014年2月 科 学 技 术 与 工 程 VoL 14 No．4 Feb．2014 1671— 1815(2014)04—0170—05 ScienceTechnologyandEngineering @ 2014 Sci．Tech．Engrg． 生物科学 青霉菌产漆酶条件及酶学性质的研究 卢庆华 邢孟兰 王 蕾 蔡 禄 (内蒙古科技大学数理与生物工程学院，包头 014010) 摘 要 通过对青霉菌产漆酶条件的优化，提高酶活，将其应用于生物制浆中。采用单因素对产酶条件进行研究，同时考察 了漆酶的酶学性质。研究结果表明最佳培养条件为：麦麸 16 L，酵母膏2g／L，AI“0．6g／L，KHPO 3g／L，30℃，pH6．0摇 瓶培养 192h。优化后漆酶的酶活提高了12．34倍。经过酶学性质的研究得出该酶的最适反应温度为30℃，而热稳定性为 20～4OoC，pH稳定性为3．6～4．0。 关键词 漆酶 产酶条件 酶学性质 木质素降解 中图法分类号 Q819； 文献标志码 A 漆酶(Laccase)发现于 1883年，是 日本学者Yo- 1 材料 shida_1从漆树 中分离得到的。是一种很有潜力的 含铜的多酚氧化酶，具有强大的催化能力 J，被称 1．1 菌种 为 “绿色催化剂” 。随着生物造纸技术的El益成 由实验室筛选得到，初步鉴定为青霉。命名为 熟和研究的深入，漆酶在造纸工业上的研究和应用 QM一001。 也逐步深入，漆酶可以选择性地降解木质素，避免损 1．2 培养基 伤纤维素和半纤维素。漆酶的高产菌株为 白腐菌， 1．2．1 基础培养基 白腐菌对木质素具有很好的降解优势和降解选择 PDA培养基：马铃薯200g，葡萄糖20g，蛋 白 性，50d时木质素 的降解率 33．9％ ～55．4％之 胨 5g，蒸馏水定容至 1L，pH 自然，1×10Pa灭菌 间 J。吴薇，等研究表明黄孢原毛平革菌和变色栓 30min。 菌Spl在 24d时对麦草的木质素降解率达到30％ 1．2．2 基础产酶培养基 ～ 65％ l 。 由于白腐菌特有的降解木素的功能，在 马铃薯200g，葡萄糖 20g，蛋 白胨5g，KHPO 生物制浆、生物漂 白、废水处理等的应用都得到了重 3g，MgSO4·7H2O1．5g，蒸馏水定容至 1L，pH 自 视。但是，由于菌种产酶较低，降解周期长，很难用 然，1×10Pa灭菌 30min。 于大规模生产。因此，今后研究的主要手段是筛选 降解效果好，生长周期短的菌种，并通过对产漆酶菌 2 方法 发酵条件的优化来提高漆酶的活性和产量。 2．1 产酶培养 通过单因素对筛选的具有较高漆酶产量的青霉 500mL的三角瓶装200mL产酶培养基，接种 菌株进行了培养条件 的优化，也对其酶学性质进行 量为5％，30qC、160r／min振荡培养，培养过程 中 了研究 ，为该菌种在木质素降解方面的进一步研究 观察菌丝生长状况，测定酶活。 奠定基础 。 2．2 酶活测定方法 漆酶活性测定 以ABTS为底物，参 照 Galli— ano_8 等人的方法进行测定。 2013年 8月29日收到，9月26日修改 教育部春晖计划 2．3 产酶条件的研究 (Z200721201020)；内蒙古 自治区高等学校科学研究项 目 2．3．1 不同碳源对 QM一001产漆酶的