原核CRISPR-Cas系统的结构功能及应用.pdfVIP

2014年 3月 四川师范大学学报(自然科学版) Mar．，2014 第37卷 第2期 JournalofSichuanNormalUniversity(NaturalScience) Vo1．37．No．2 原核 ERISPR—Cas系统的结构功能及应用 冯 红 ， 董 阁 ， 雍 彬 ， 李 维 (i．四川大学生命科学学院生物资源与生态教育部重点实验室，四川成都610064； 2．四川师范大学 生命科学学院，四川成都610066) 摘要：CRISPR—Cas系统是新近在原核生物中发现的一种抵御外来DNA入侵的免疫机制，由一个成簇 规则间隔的短回文重复序列 (CRISPR)和附属的蛋白质 (Cas)组成 ，广泛分布于真细菌和古菌中．CRISPR由 重复序列及其间隔序列组成 ，间隔序列来 自于过去的入侵DNA，并插入到细菌的CRISPR排列中．一旦出现 新的入侵 ，CRISPR转录，其RNA经过加工后与 Cas蛋白质组成一个核蛋白复合体，该复合体通过 RNA与 入侵DNA序列之间的互补配对 ，结合 目标序列，最后 Cas蛋白质将入侵DNA降解．此外，基于CRISPR系统 中的Cas9蛋白，发展了一种新的基因组编辑技术 ，在不同的细胞中均能获得高效的基 因定点打靶，展现出 巨大的潜力． 关键词：CRISPR；Cas；免疫；噬菌体 ；基因组编辑；Cas9 中图分类号：Q933 文献标志码 ：A 文章编号：1001—8395(2014)02—0268—14 doi：10．3969／j．issn．1001—8395．2014．02．024 CRISPR (Clusteredregularly interspaced short 序列完全相同 卜J．所以又提出了新的假说，认为 palindromicrepeats)称为成簇规则间隔的短回文重 原核 CRISPR—Cas系统可能是细菌抵御外来质粒 复序列，最早于 1987年在大肠杆菌中发现 ¨，随后 和噬菌体侵入的一种免疫防御机制．2007年 R． 陆续在许多真细菌和古菌基因组中发现了这种重 Barrangou等¨钊首次在乳酸 菌 Streptococcusther- 复序列 -51．2002年 R．Jansen等 详细比较分 mophilus中，用实验证实了CRISPR—Cas系统的生 析原核基因组中的这种重复序列，更重要的是发现 物学功能，它确实是原核细胞抵御噬菌体侵染的一 在此重复序列的旁侧经常伴随出现保守的系列基 种新的免疫机制．次年，L．A．Marraffini等 在 因．根据重复序列的排列特征，他们将这种独特的 Staphylococci中证 明 CRISPR—Cas系统同样也能 重复序列命名为 CRISPR，保守基因编码的蛋白质 够干扰质粒的结合转移． 统称为 CRISPR 附属蛋 白(Cas，CRISPR—associa— 随后几年，在 CRISPR—Cas系统的免疫机制以 tionproteins)．由于这种序列在细菌和古菌中分布 及 Cas蛋 白质结构功能等方面的研究取得 了重大 如此之广，因此推测 CRISPR—Cas系统应该具有某 的进展 ，而且基于 CRISPR—Cas系统发展 了一种新 种细胞功能． 的DNA编辑技术，在原核和真核细胞中成功地用 后来，陆续在不同的细菌中检测到CRISPR位 于基因组的编辑、改造，显示出巨大的潜力．本文较 点的转录产物 crRNA(CRISPRRNA) ，但 全面综述 了原核 CRISPR—Cas系统的分布、组织结 crRNA通常较编码基因序列短，说明这些转录产物 构和作用机理以及在基因组编辑等方面应用，以期 是经过核酸酶修饰加工后产生的．此外，由于 Cas 推动国内在此相关领域的研