农杆菌介导的菊花遗传转化和ipt基因导入.pdfVIP

农杆菌介导的菊花遗传转化和ipt基因导人 李名扬 兄岳恩 郑 丽 西〔南农业大学园艺因林学院，中国.重庆 400716) 摘 要:通过大1再生试验选择了山城之光和日本小黄两个品种作为遗传转化的材料(山城 之光为切花菊，日本小黄为小菊).所选用的外源墓因为抑制叶片衰老的SAG一工PT基因，以期 得到衬贮运、别凡播寿命长的切花菊和抗衰老、花期长的绿化小菊. 工、建立了以幼叶和茎段为外植体的再生体系 取植株冈碾开的幼叶或幼茎，消毒后接人MSl(MSO+I.OM昨2,4D+O.Img/f.6-BA)中预培养2-6d后，转 人MS2(MSO+0.5m叨6-BA+O.lmg/LNAA)(幼叶)、MS3(MS0+3.Omg/1bBA+0.lmg/LNAA)(茎段)后可直 接再生出芽.其中，菊花品种山城之光和日本小黄的幼时经预培养后再生率可达100%.日本小黄茎段再生率达 92%，山城之光再生率为70%.再生芽在1/2MS培养基上经7-10d可诱导生根，生根率达100%. 2、建立了以幼叶为受体的遗传转化体系 取切花菊 “山城之光”和/，l有 “日本」、白”的无菌苗叶片，切成4mm，大/，J、以OD6o,}=:0.5的农杆菌掖感染 30min,渔除菌液。接人Msl培养基上，于暗处共培养3d。共培养后，以阴加有500mg/L的Cef和500m叭的 Cacti的MSO液味材右养基展荡脱菌培养2小时无菌水冲洗5次无菌池纸洗干水分然后接人MS2+50m叭Cef 的培养荃上延迟筛选培养3d，再转人MS2+50mg/LCef+5mg/LKm培养基上进行筛选分化培养。30d后可分化 出绿芽，将分化的绿芽在1/2MSO+1Omg/LKm培养基上进行生根筛选，把能够正常生根的苗移栽田间州拓步一 步的鉴定。 3、通过PCR扩增表明，弥渗勺有?J3的植株可以检点1出有目的基因((ipt基因)的存在，目的基因已成功地 插人菊花的基因组中。园艺性状观察表明，转基因植株和 “野生型”植株存在有一定的差异。 关.词:菊花:it)t基因:遗传转化:植株再牛 菊花是原产于我国的传统十大名花之一，也是世界四大鲜切花之一，占鲜切花总量的23%，其在世 界范围内的周年供应及流通具有十分重要的意义。 由于菊花的传统育种方式是利用芽变的方法来选育新品种，速度慢，定向性差 利用基因工程技术， 有目的地向菊花中导人一些墓因，来创造抗病性好、观赏价值高的菊花新品种，不但可以有目的地改良 特定性状，还可以缩短育种年限和加快育种进程。 本文通过大量的再生试验选择了两个品种 (山城之光和日本小黄)作为遗传转化的材料，山城之光 为切花菊，日本小黄为小菊。所选用的外源基因为抑制叶片衰老的SAG-IPT基因，以期得到耐心云、 瓶插寿命长的切花菊山城之光和抗衰老、花期长的绿化小菊日本小黄。 材料与方法 1.1材料 1.1.1植物材料 切花菊山城之光、白绣坊 白雪、光辉和刁铺 日本刁、黄五个品种由园艺系园林花卉教研室的陈老师惠赠，采自园艺系 花卉苗圃 176 1.1.2基本培养基 1.1.2.1细菌培养基 LB培养基 Bact-otryptone log/L Bact-oyeastextact 5g几 NaCl log/L pH7.2 固〔体培养基加1.5-2%的琼脂) YEB Bact-otryptone 5g/L Bact-oyeastextract lg/L Beefextract 5g/L MgS04 7H20 0.439g/L pH7乃 (固体培养基加人L5-2%的琼脂) 1.1.2.2植物培养墓 基本培养基MSO: MS(Mttrashige-Skook,1962)矿质元素+MS有机物++7.5g/LVja+30g/L蔗 糖,pH5.8。液体培养基不加潮旨. 几种主要的培养基: 幼叶和茎段预培养基MSI:MSO十1.Otn到L2斗D+0.2mg(LBA 幼叶分化培养基MS2: MSO+0.5mg/LBA+O.lmg/LNAA 生根培养基1