P49抗原基因及Caenorhabditis+elegans+homologus基因在旋毛虫中的研究.pdfVIP

摘要 摘要 旋毛虫是一种重要的人兽共患寄生虫，寄生于人体可导致严重的疾病。为了 了解我国几个不同地区旋毛虫之间的种属关系，我们对这些地区的旋毛虫进行了 线粒体细胞色素氧化酶亚单位I(COI)基因的扩增，并得到了正确的COI基因。 传距离矩阵及系统发生树。分析可知，Tl与东北株COI基因的相似性高达 相似性为95．0％，遗传距离为0．0412，同源性也很高，两者与T3株有一定的差 别。湖北株与云南株的遗传距离为0．0000，两者的同源性最高。而河南株与其它 几种的差异均比较大，这是由什么原因造成的有待研究。因此COI基因可作为 鉴定旋毛虫亲缘关系远近的有效工具。 以旋毛虫基因组DNA为模板，我们扩增与C lin一28基因同源的片段， elegans 将序列与C lin一28的部分序列在Genedoc软件中进行比对和分析，同源 elegans 性达到93％以上，说明旋毛虫中存在砌．船同源基因。因此，我们利用原位杂 交技术研究了妇一船及与其相关的3个异时性基因在旋毛虫中的分布情况。在胚 胎、5日成虫体内都检测到lin．28mRNA的存在，在早期胚胎中均匀分布于细胞 质中，随着胚胎发育和细胞数目的增多而减少，在成虫期分布于虫体的头部及咽 部。let-7mRNA在早期胚胎中的分布与砌．28mRNA的分布类似，但在中晚期 逐渐分布于胚胎四周至幼虫形成期仍有微量表达，在成虫中主要分布于头咽部和 尾部。lin．4mRNA主要在胚胎早中期均匀分布，晚期则多见于四周，成虫仅见 于头咽部。砌．14mRNA在胚胎内分布与砌．28mRNA相同，成虫中也多位于头 虫虫体2／5处也有分布。 为了解旋毛虫排泄分泌抗原中P49抗原的功能，我们对旋毛虫的P49抗原 基因进行了克隆和表达鉴定。我们利用3’RACE法对旋毛虫P49抗原基因的 cDNA克隆和筛选，获得的阳性质粒进行了酶切验证和测序。将序列正确的重组 质粒酶切后利用融合表达载体pGEX构建了P49重组表达质粒并转化到BL21 摘要 凝胶电泳对表达结果进行了分析，发现重组P49融合蛋白分子量大小约为 blot 60KDa。并进行了重组蛋白的纯化和免疫获得了相应的抗体。利用western 分析了该蛋白在不同发育时期的表达情况，发现P49在旋毛虫的成虫和肌肉幼虫 中均有表达，且肌肉幼虫中较多。此外，通过构建p49．L4440质粒，我们对C． elegans进行了RNAi，发现P49RNAi后Celegans寿命明显缩短。 为了更好的了解旋毛虫的基因组信息及筛选控制旋毛虫的靶基因，我们以旋 毛虫EST库及C PCR elegans基因组信息为依据设计了一系列引物进行3’RACE 扩增，得到了3个基因的eDNA片段。克隆后测序并通过序列分析发现，它们 翻译得到的蛋白与C 白有该蛋白家族特有的RNA识别结构域。 关键词：旋毛虫；COI基因；异时性基因；P49抗原；cdc．42 Abstraet isall intestinal nematodeinhumanandanimal Trichinella important parasitic to the whichcallcauseserioustrichinellosis．Inorder between analyserelationship the Trichinell