降解多环芳烃芽孢杆菌NAPZ的萘诱导蛋白研究 Naphthalene induced proteins of PAH degrading Bacillus sp. NAPZ.pdfVIP

生态环境学报 2012, 21(12): 1980-1984 Ecology and Environmental Sciences E-mail: editor@ 降解多环芳烃芽孢杆菌NAPZ 的萘诱导蛋白研究 张春杨，李超，李睿，聂彩辉，徐晓晖，宋关玲，马汇泉 山东理工大学生命科学学院，山东 淄博 255049 摘要：对降解多环芳烃的芽孢杆菌 Bacillus sp. NAPZ 进行了萘诱导蛋白的研究，以揭示此类细菌参与萘降解的关键蛋白组 分及可能的降解机制。将NAPZ 活化、培养、镜检，测量其在600 nm 处的吸光值绘制生长曲线，选择指数生长期对NAPZ 进行萘诱导，在特定时间收集菌体，浓缩后进行超声破碎，使蛋白释放，样品进行 SDS电泳和考马斯亮蓝染色，之 后对电泳结果进行分析。形态学观察表明，NAPZ 为杆状细菌，革兰氏染色结果呈阳性，产芽孢。生长曲线显示培养 8h 时 细菌进入指数生长期，12 h 时生长速率最大。对菌体破碎研究表明，超声破碎5 min （55 w ，超声5 s ，间隔10 s ）效果较 好。SDS电泳结果显示，与对照相比，诱导培养 12 h 的 NAPZ 蛋白样品中 12-1 （M 约 53 000)、12-2 （M 约 51 r r 000)、12-4 （M 约36 000)有明显表达量升高，另外出现一新增条带 12-3 （M 约38 000) ，其相对分子质量大小与诱导型龙胆 r r 酸双加氧酶一致，推测该菌可能通过龙胆酸途径降解萘，而不同于一般革兰氏阴性细菌的邻苯二酚途径。本研究对降萘芽 孢杆菌 NAPZ 进行了生长曲线的测定和超声破壁条件的研究，并发现了诱导及非诱导条件下 NAPZ 蛋白表达量差异，初步 推测高表达蛋白及新增蛋白与菌株对萘的降解利用有关。 关键词：多环芳烃，生物降解，芽孢杆菌，萘，诱导蛋白 中图分类号：Q939.9 文献标志码：A 文章编号：1674-5906 （2012 ）12-1980-05 引用格式：张春杨，李超，李睿，聂彩辉，徐晓晖，宋关玲，马汇泉. 降解多环芳烃芽孢杆菌 NAPZ 的萘诱导蛋白研究[J]. 生态环境学报, 2012, 21(12): 1980-1984. ZHANG Chunyang, LI Chao, LI Rui, NIE Caihui, XU Xiaohui, SONG Guanling, MA Huiquan. Naphthalene induced proteins of PAH degrading Bacillus sp. NAPZ [J]. Ecology and Environmental Sciences, 2012, 21(12): 1980-1984. 多环芳烃（ Polycyclic aromatic hydro- PAHs 降解分子基础这一关键问题有全面而深入 carbons ，PAHs) 是含两个及以上芳环的烃类化合 的了解[8-10] 。但由于有毒化合物的降解途径和相 物的统称，广泛分布于自然界和工农业废水中。 关基因很多均仍是未知，因此，通过蛋白质组学 因其毒性大并具有不同程度的遗传毒性而成为严 的方法，可为研究细菌在有毒污染物环境下酶的 重的环境污染物[1] 。PAHs存在稳定，难以分解， 变化，提供有力的支持。本研究对实验室保藏的 并能通过生物积累和生物放大作用对生态环境和 多环芳烃降解菌—— 芽孢杆菌Bacillus sp.NAPZ 人类健康造成严重威胁，因而引起人们越来越多