聚乳酸丝素复合材料的制备和肝细胞的生长性能研究.pdf

复合材料探索与求实 聚乳酸／丝素复合材料的制备和肝 细胞的生长性能 吕 强，胡 琨，冯庆玲，崔福斋 (清华大学材料科学与工程系先进材料实验室，北京 100084) 摘要：将不溶性的丝素微球加入聚乳酸溶液，使用冻干法制得聚乳彬丝素复合支架 材料。电镜结果显示复合材料形成了良好的三维支架结构，丝素微球均匀地分布在聚乳酸支 架基体内。细胞结果表明，HepG2细胞在三维材料表面黏附和伸展状况良好。同聚乳酸支 架相比，细胞在复合支架上的生长情况有了显著提高，细胞能相互作用，形成大于100p,m 的聚合体。考虑到聚乳酸能形成良好的三维支架结构，而丝素能提高细胞的相容性， 聚乳酸／丝素复合材料将成为一种非常有前途的组织支架基体。 关键词：聚乳酸；丝素；肝组织工程 1 引 言 组织工程目前受到人们越来越多的关注。多孔三维支架在组织工程中具有非常重要的作 用[1’2】。为了促进细胞的生长，三维支架应当具有生物相容性，可降解性，高空隙率，并能 够加工成所要求的形状¨J。 目前应用最为广泛的支架材料主要有两大类，一种是合成可降解聚合物，例如聚乳酸， 聚羟基乙酸等H，5]。另一种则是天然高分子，如胶原和丝素等M州。合成高分子容易成型， 机械性能优良，其降解性也可以控制，从而满足新组织形成的要求，但合成材料缺乏细胞识 别因子，从而使材料亲水性差，细胞黏附不充分。反之，天然材料虽然能有效地同细胞相互 作用，具有优异的细胞相容性，然而天然生物材料制备的支架机械性能差，成型困难。将天 然材料和合成材料复合，使支架具备两种材料的优点是解决组织工程用支架材料的非常有前 途的一种方法一，l引。丝素生物相容性良好，已经引起生物材料学家广泛的兴趣，很多研究表 明丝素和胶原具有相似的生物相容性u1’12J。但同其他天然材料一样，丝素很难形成良好的 三维支架结构，这极大地限制了丝素在组织工程上的应用。 在本文中，我们运用一种全新的方式制备具有高空隙率的聚乳酸／丝素复合支架。在复 合支架中，丝素微球的尺寸大约为几十微米，正适合于细胞的黏附。另外，我们还研究了聚 乳酸／丝素复合材料在肝组织工程中应用的可能性。 2材料和方法 胶1h后，使用去离子水充分清洗。将脱胶丝素放入氯化钙一水一乙醇三元溶液中(摩尔比 20 聚乳酸／丝素复合材料的制备争肝细胞的生长性能 沉淀出来，将沉淀物清洗干燥后，制得不溶性丝素微球。 将聚乳酸融解在1，4一二氧六环中，浓度为8％，然后加入丝素微球，并充分搅拌。将 混合物倒入玻璃培养皿中，冷冻干燥，制得聚乳酸／丝素三维复合支架材料。丝素和聚乳酸 的质量比为50：50。 JSM一6460LV 三维支架的表面和截面形貌通过表面电镜观察(JEOL SEM，日本)。其 结构特征通过红外光谱(NICOLET560，美国)获得。细胞培养采用标准静态培养方法，并 用表面电镜来观察细胞的生长情况。 3结果 图1显示了聚乳酸支架的表面和截面形貌。其表面的孔径范围在50～200肛m。截面图表 明所有的孑L都是相互贯通的。从截面图中还可以看出，聚乳酸支架表现出层状结构，层之间 的间隔大约为150—2001a,m。 图1聚乳酸支架的表面(a。b)和截面(c，d)电镜图 图2显示了聚乳酸／丝素复合材料的电镜图，其表面孔径大小为80一1201a,m，同聚乳酸 支架相比，孔的结构更加均匀。截面图显示复合材料支架为直径1001山m的相互贯通的微孔 结构，并且没有出现聚乳酸支架中的分层现象。这表明丝素的加入促进了成型过程中的均匀 性。电镜结果还表明，丝素微球均匀地分布在聚乳酸基体中，从而有效提高材料的生物相 容性。 表面全反射红外光谱的结果如图3所示。聚乳酸支架在1757cm～，l456cm～， 1 619cm。和 184cm‘1和1088em一具有特征吸收峰。当丝素微球加入聚乳酸基体后，在1 1535cm。1出现新的吸收峰。因为这两个吸收峰属于丝素