骨组织冷冻过程中的CPA导入和洗脱过程的传递现象研究.pdfVIP

化 工 进 展 ·228· CHEMICALINDUSTRYANDENGINEERINGPROGRESS 2003年第22卷增刊 骨组织冷冻过程中的CPA导入和洗脱过程的传递现象 柏 巍 马学虎葛 丹 程眈 刘天庆崔占峰 (大连理工大学干细胞与组织工程研究室，大连116024) 摘要通过酶解离台盼蓝染色计数法和渗透压的测定对SD大鼠颅骨骨块超低温保存过程中冷冻保护荆的导 入和洗脱过程的传递特性进行了初步研究，试图找到较优的导入。洗脱方案及其规律．实验结果表明：对于SD 大鼠颅骨骨块，浓度为15％的二甲亚砜作为CPA的渗透过程在10min左右即可达到平衡，低浓度CPA对组织内 细胞的溶质损伤主要是渗透引起的，酶解离法对较低浓度的CPA有较好的适用性． 关键词生物组织，超低温冷冻，渗透压，平衡时间。骨决 目前，临床上对于大面积骨缺损的治疗，主要 的洗脱可以看作是导入的逆过程，处理不当同样会 采用自体骨嫁接或异种骨移植，或者广泛采用金属 因为细胞内外渗透压差异和CPA的毒性导致细胞 合金、高分子聚合物等各种人工骨替代材料【l一】。 的死亡。因此，本实验在考察CPA导入平衡时间和 但比起人工骨，天然骨经过亿万年的自然选择，具 组织内细胞成活率及溶液渗透压的关系的同时，对 有无与伦比的强韧性、功能适应性和对损伤的自愈 CPlA的洗脱方案也做了初步的探讨。从而为骨组织 能力。若能使病变或损伤的骨组织恢复到天然状态， 冷冻保护剂的导入和洗脱提供实验基础，为超低温 则达到了骨缺损修复的极致【3l。虽然天然骨容易获 冷冻做准备，为最终能成功保存骨组织奠定基础。 得，但要使其长期保存且功能不变却很难。深低温 l实验材料和方法 冷冻是一种公认较理想的保存方法。与传统的冷冻 干燥法比较，其具有更强的机械性能，适用于承重 1．1材料 或结构重建的大骨块的保存[41，可降低异体骨的抗 材料取自3天龄SD大鼠颅骨。 原性，对骨诱导、骨传导以及生物力学反面的影响 1．2方法 较小，因而是较理想的保存方法，且便于携带和 1．2．1颅骨组织培养 运输f，1． 无菌操作下，取3day龄SD大鼠颅骨，经无菌 随着实验设备的不断改进和研究的深入，各种 细胞的超低温冷冻技术已经很完善，已经可以较好 培养基中将其剪成约4mmX4mm大小的骨片，置 地冻存白细胞淋巴细胞、巨噬细胞【6．7】、神经细胞[91 以及细剖旧一1】和血液【12l。但对于组织的超低温冷 养。至少培养24h以使其适应体外环境以供试验用。 冻，成功的例子并不多，目前研究较多的组织包括 CPA选用二甲亚砜(DMSO)。 动脉【81、皮肤f13．1钔、胚胎【15．161、角膜【17．1引、肝脏f20． 1．2．2实验一：CPA的导入 引J等，但几乎没有任何的临床应用。 无论是细胞还是组织的超低温冷冻，其过程都 IILCPA， 离心管中，用微量移液枪精确加入200 大致相同，