毛冬青甲素对K562红白血病细胞survivin和bax蛋白的影响.docVIP

精品论文 参考文献 毛冬青甲素对K562红白血病细胞survivin和bax蛋白的影响 赵早云 朱惠斌 席建元 江劲波 周欣欣（湖南中医药大学第一附属医院 湖南长沙 410007） 【摘要】目的：观察毛冬青甲素对K562红白血病细胞survivin和bax蛋白的影响。方法：采用流式细胞术（FCM）检测毛冬青甲素对K562细胞survivin蛋白和bax蛋白表达水平。结果：不同浓度毛冬青甲素处理K562细胞48h后，流式细胞仪分析结果显示bax蛋白表达升高，与对照组比较差异具有显著性（P ＜0.01）；而survivin蛋白表达下降，与对照组比较差异具有显著性（P ＜0.01）。结论：毛冬青甲素可抑制survivin上调，促进bax的表达。 【中图分类号】R96【文献标识码】A【文章编号】2095-1752（2013）03-0142-01 毛冬青系毛冬青科植物，微苦、甘、平、归心经，含多种黄酮、酚、甾醇、氨基酸、糖、鞣质、三萜等成分，毛冬青甲素（IA）是从毛冬青中分离出的一种活性成分，分子式为C34H48O6Na,研究发现IA（10-5mol∕L）对心肌钙离子内流具有明显促进作用（P﹤0.05）[1]。其所具有的正性肌力作用可能由于药物加快了细胞钙的转运率所致[2]。IA可抑制血小板激活时的钙内流，与钙慢通道拮抗药VER非常类似[3]，同时通过对102例鼻咽癌患者临床对照试验，毛冬青注射液对组织淋巴结消失的平均放疗剂量明显低于对照组，增敏比达1.54，提示IA的钙通道阻滞及放疗有增敏功能[4]。本文以红白血病K562细胞为研究对象，探讨毛冬青甲素诱导红白血病细胞K562凋亡过程中对survivin和bax基因蛋白表达的影响，从而为红白血病的预防和治疗提供实验依据。 1 材料与方法 1.1 细胞培养 K562细胞株购自上海雅洁公司，培养于含10%胎牛血清、100U/ml青霉素，100U/ml链霉素的PRMI-1640培养基中，置37℃，饱和湿度5%的CO2培养箱中培养，2～3d传代1次，取对数生长期细胞用于实验。 1.2 试剂及仪器 毛冬青甲素由广东省博罗先锋药业集团有限公司提供（批号111201）。Survivin(71G4B7)(Alexa) 488 conjuate Rabbit mAb购于cell signaling公司（批号#2810s）。Bax(2D2)AF647购于santa cruz公司（批号sc-20067）。PureLinkTM购于ambion公司（批号Catno）。RNAmimi kit 购于ambion公司（批号（lotno.987201）。RNA提取试剂盒由invitrogen公司提供，RP-PCR试剂盒由invitrogen公司提供。流式细胞仪购自BD公司的FACSCaLibur，PCRABI公司的2720，琼脂糖凝胶电泳仪购自北京北信未来电子科技中心，型号：DL21-SH-2040 1.3 实验方法 取对数生长期K562细胞，分别加入0、0.2、0.4g/ml 的毛冬青甲素处理48h 后弃培养液，收集细胞。细胞置于4%的多聚甲醛37℃固定10min，冰上冷却1min。90%甲醇冰上孵育30min，含0.5%BSA 1times;PBS洗涤细胞2次，Alexa Fluorreg; 488标记的兔抗人survivin抗体(CST, #2810)和Alexa Fluorreg; 647标记的bax (santa cruz, #20067)抗体室温孵育 1h，0.5%BSA 1times;PBS洗涤1次，空白对照只加入细胞。流式细胞仪测定，每管计数10 000个细胞。流式细胞仪测定细胞阳性率，细胞阳性率变化表示各蛋白处理前后的表达变化情况，阳性率(%)=实验组细胞的阳性率-空白对照组细胞的阳性率。 2 FCM检测survivin和bax蛋白表达的结果 毛冬青甲素处K562细胞48 h后，流式细胞仪分析结果显示bax蛋白表达升高，与对照组比较差异具有显著性（P＜0.01）；而survivin蛋白表达下降，与对照组比较差异具有显著性（P＜0.01），见表1。 毛冬青甲素作用于K562细胞48 h后survivin蛋白和bax蛋白表达的变化（x-plusmn;s，n=4） 分组 荧光指数 survivin bax 对照组（g/ml） 39.81plusmn;2.72 15.12plusmn;0.75 毛冬青甲素组0.1 25.70plu