第六章微生物诱变育种.ppt

第四节 营养缺陷型菌株的应用 营养缺陷型菌株不论在科学实验中，还是在生产实践中都具有广泛的用途。 １、利用营养缺陷型菌株定量分析各种生长因素的方法称为微生物分析法。常用于分析食品中氨基酸和维生素的含量，因为在一定浓度范围内，营养缺陷型菌株生长繁殖的数量与其所需维生素和氨基酸的量成正比。这种方法特异性强，灵敏度高，所用样品可以很少而且不需提纯，也不需要复杂的仪器设备。 　２、利用营养缺陷型菌株作为研究转化、转导、接合等遗传规律的标记菌种和微生物杂交育种的标记。 　由于微生物经杂交育种后形成的杂种在形态上往往与亲本难以区别，因此常常选择不同的营养缺陷型来进行标记，通过测定后代的营养特性，以判断它们杂交的性质。 　３、利用营养缺陷型菌株测定微生物的代谢途径，并通过有意识地控制代谢途径，获得更多的我们所需要的代谢产物，从而成为发酵生产氨基酸、核苷酸和各种维生素等的生产菌种，例如利用丝氨酸营养缺陷型可以生产更多的赖氨酸。 * 抗噬菌体菌株的选育 在工业微生物发酵过程中，不少品种遭受噬菌体的感染，使生产不能正常进行。为此，可采用以下方法：消灭噬菌体和选育抗噬菌体菌株。噬菌体易变异，要不断地选育抗噬菌体菌株。 抗噬菌体菌株选育的方法 1)?自然选育：以噬菌体为筛子，敏感的菌株不经任何诱变自然突变获得的抗性菌株。抗性突变频率低。 2)?诱变选育：敏感菌株经诱变因素处理，然后将处理过的孢子液分离在含有高浓度的噬菌体的平板培养基上，经处理后的存活的孢子中，如存在抗性变异菌株就能在此平板上生长。???? 3)?将敏感菌株经诱变因素处理后接入种子培养基，待菌丝长浓后加入高浓度的噬菌体再继续培养几天；再加入噬菌体反复感染，使敏感菌被噬菌体所裂解，最后取出菌丝进行平板分离，从中筛选抗性菌株。 * 思考题 初筛和复筛有什么不同（目的、要求、方法)？ 诱变剂的最适剂量如何选择？ 试设计诱变选育氨基酸营养缺陷型细菌菌株的整个方案，并做出说明。 营养缺陷型检出有哪几种常用方法？原理如何? 营养缺陷型缺陷类型测定和生长谱测定的基本原理是什么？  * * 饱浸含某种指示剂的固体培养基的滤纸片变色圈 指示剂直接掺入或喷洒固体培养基，菌落周围形成变色圈。如淀粉的平皿上喷上稀碘液 固体培养基中渗入溶解性差、可被特定菌利用的营养成分，造成不透明的培养基背景。菌落利用此物质形成透明圈。 利用一些有特别营养要求的微生物作为工具菌，如待筛选菌具有该营养物的前体转化成营养物 能力，工具菌就能围绕该菌生长 待筛选的菌株能分泌产生某些能抑制工具菌生长的物质 突变株的筛选： （1）产量突变株的筛选：琼脂块培养法? （2）抗药性突变株的筛选：梯度平板法 （3）营养缺陷型突变株的筛选：影印平板法等 （4）形态、色素、酶活性和拮抗性等变异菌株的筛选 诱变 春日霉素产生 菌的孢子悬液 · 春日霉素高产菌种琼脂块培养法筛选 （1）产量突变株的筛选 含供试菌种 （拮抗对象）的琼脂平板 优点：在此条件下，各琼脂块所含养料和接触空气面积基本相同，且产生的抗生素等代谢产物不致扩散到琼脂块外，因此测得的结果与摇瓶实验结果十分相似，而工作效率却大为提高。 红点为抑菌圈 弱抗性 中抗性 强抗性 含异烟肼 接敏感菌 含突变株 （2）抗药性突变株的筛选方法——梯度培养皿法 是定向筛选抗药性突变株的一种有效方法。（用此法筛选抗异烟肼的吡哆醇高产菌株） 利用梯度平板法筛选抗代谢类似物突变株，可达到定向培育的目的 筛选方法: 诱变→淘汰野生型→检出→鉴定营养缺陷型 ①诱变 ②淘汰野生型: 抗生素法、菌丝过滤法 ③检出缺陷型： 同一平板——夹层培养、限量补充 不同平板——逐个检出、影印接种 ④鉴定营养缺陷型：生长谱法 （3）营养缺陷型突变株的筛选 （4）形态、色素、酶活性和拮抗性等变异菌株的筛选 * ●营养缺陷型菌株是指通过诱变而产生的缺乏合成某些营养物质(如氨基酸、维生素、嘌呤和嘧啶碱基等)的能力，必须在其基本培养基中加入相应缺陷的营养物质才能正常生长繁殖的变异菌株。其变异前的菌株称为野生菌株。 第三节 营养缺陷型突变体的筛选及应用 1、与营养缺陷突变株的筛选相关的几个概念 相关培养基 基本培养基 [-] 完全培养基 [+] 补充培养基 [A]或[B]等 三类遗传型 野生型 [A+B+] 营养缺陷型 [A+B-] 原养型 [A+B+] 一、营养缺陷型突变株的筛选 基本培养基(MM): 凡是能满足野生菌株正常生长的最低成分的合成培养基； 完全培养基(CM): 在基本培养基中加入一些富含氨基酸、维生素及含氮碱基之类的天然有机物质，如蛋白质