Morganella+morganii+J8基因组文库的构建研究.pdfVIP

Morganella+morganii+J8基因组文库的构建研究.pdf

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发酵工程学科的进展 ——第四次奎圆发酵工程学术讨话套论文集 J一8基因组文库的构建 Morganellamorganii 张鹏华。张粱,王正祥,石贵阳 (扛南大学生物工程学院,无锯214036) 摘要:MorganellamorganiiJ--8能够转化前体物质生成d一伪麻黄碱,但其本身具有致 病性且转化效率较低,应用受到很大限制。本研究利用限制性内切酶HindlⅡ将基因组DNA 部分酶切,与啊同种限制性内切酶酶切的cosmid质粒pHC79为载体连接重组,电转化构建 coli 基目小库.同时通过体外包装,婚染EscherichiaS17构建大片段基因组支库。为Mot- J一8未知羰基还厚酶的克隆及其它研究打下基础. ganellamorgattii 正常菌群,在自然界中,如水,土壤及各种腐败物中广泛存在,特别是腐败动物尸体中,是 引起严重感染的条件致病菌o’2]。目前国内外有关摩氏摩根菌研究文献较少。本研究室 筛选得到的Morganellamorganii J一8,是一种可以转化前体物质生成手性药物d一伪 麻黄碱的菌株…,这为利用微生物直接生物转化法生产麻黄碱探索了新的途径。但菌体 本身具有致病性,转化得率较低,限制了该菌的应用。本文以cosmid质粒为载体,构建 了MorganellamorganiiJ--8的基因组文库,为研究并阐述该菌的某一特定生理生化现 象并最终弄清其本质打下基础。 1材料与方法 1.1材料 1.1.1菌株和质粒 coli MorganellamorganiiJ一8由本实验室筛选保藏,宿主菌EscherichiaS17、载体 coli pHC79、大肠杆菌EscherichiaJMl09由本研究室保藏。 1.1.2培养基和培养条件 LB培养基(每升含酵母抽提物5 g,胰蛋白胨10g,氯化钠10 g,调pH至7.o)用于 培养大肠杆菌,37℃,液体培养时200 r/rain;蛋白胨酵母膏培养基(每升含葡萄糖10 g, 酵母膏10g蛋白胨20g,K2HPO·3 0.2 2 g,MgSO.·7H20g,NaCIg,调pH至7.o)用 于培养MorganellaJ一8,30℃,液体培养时150 morganii r/rain;固体培养基加入1.5 %琼脂粉。 1.1.3工具酶和试剂 助。 作者简介:石贵阳,男,1963年生,博士,教授,E—mail#gyshi@sytu.eda.cn。 张鹏华等:MorganellaraorganiiJ一8基因组文库的构建 I)Marker均 限制性内切酶、碱性磷酸酶、T.DNA连接酶、Lambda/Ecol30I(Sty 为上海晶美生物工程公司产品,质粒小量抽提试剂盒为碧云天生物技术研究所产品}x噬 均为国产和进口分析纯试剂。 1.2方法 1.2.1IVL morganiiJ一8基因组DNA获得 提取方法参考文献[4]稍有改动,-20℃保存,构建文库使用。 1.2.2高分子量DNA

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