核基质蛋白在姜黄素诱导人永生化表皮HaCaT细胞凋亡过程中的变化研究.pdf

摘要 摘要 基础上，应用选择性抽提整装透射电镜和蛋白质组学分析技术，对HaCaT细胞 诱导凋亡过程中核基质．中间纤维系统的构型变化和核基质蛋白组成的变化进行 系统研究。分析鉴定与表皮细胞凋亡相关的特异核基质蛋白，并探索它们在表皮 细胞凋亡过程中的调控作用，以期能够在较为整体的水平上进一步认识表皮细胞 凋亡及其机理，从而找出表皮细胞凋亡研究的新方向。 实验结果显示，经7．5I．tg／mL姜黄素处理之后，人永生化表皮HaCaT细胞 的增殖受到明显抑制，细胞生长抑制率达83．03％：细胞周期检测出现亚二倍体 (亚Gl期)细胞峰值，细胞凋亡率达13．1％，并发生G2／M期阻滞；琼脂糖凝 胶电泳出现细胞凋亡典型的DNA“梯状”条带；光镜和透射电镜观察结果显示， 经姜黄素诱导处理后的HaCaT细胞出现了细胞体积缩小、核质比例减小、细胞 核固缩、核内染色质凝聚、线粒体肿胀、内质网网腔扩大、出现凋亡小体等显著 的凋亡特征；而且与细胞凋亡相关的癌基因bcl-2表达下调，抑癌基因p53，fas， bax等表达上调。选择性抽提整装光镜和电镜观察显示，经姜黄素处理的HaCaT 细胞的核基质和中间纤维比对照组明显稀疏，且分布更加不均匀，并分别与核纤 层连系，形成趋于断裂但相对还较为完整的网状结构；双向凝胶电泳分析显示在 姜黄素诱导HaCaT细胞凋亡前后存在27个差异表达的核基质蛋白，经质谱分析， 鉴定了其中的21个蛋白，其中在凋亡的HaCaT细胞中表达上调的9种蛋白鉴定 TCP1、RNA 为：Chaperonincontaining bindingmotif、Hypotheticalprotein 8230、serine inhibitor、SUMO-l-specific At49l proteinase NUPl factorV 3： 07、coagulation factor、Caspase precursor、Apoptosis-inducing 2、 表达下调的6种蛋白质为LMNAprotein、Vimentin、Glyeosyltransferase，family Actin、MAP／microtubulekinase、translationinitimionIF一2。 affinity—regulating factor 诱导凋亡处理后新出现的6种蛋白质为Alcohol dehydrogenaseINAOP+】、锌指蛋 classI shock90kDa 白ZNF483、MHC antigen、M-phasephosphoprotein·l、Heat kinase protein、Protein 摘要 classI protein，NUPl07，HSP90，SUMO一4蛋白酶，ZNF483protein，MHC antigen， TCPl外，其余均为首次在核基质中发现的蛋白质。 Chaperonincontaining 研究结果表明，7．5pg／mL姜黄素对人永生化表皮HaCaT细胞的凋亡具有显 著诱导作用，在HaCaT细胞凋亡过程中不仅其核基质．中间纤维系统构型产生了 明显的凋亡特征性变化