普鲁兰酶逆向合成麦芽糖基-α-甜环糊精.pdfVIP

FOODANDFERMENTATIONINDUSTRIES 普鲁兰酶逆向合成麦芽糖基- 环糊精 张永伟 ，徐学明，赵建伟 ，王金鹏 ，金征宇 (江南大学 食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 ，214122) 摘 要 以麦芽糖和 Ot一环糊精作为底物 ，利用普鲁兰酶逆向合成作用合成了麦芽糖基一d一环糊精。用薄层色谱 、 液一质联用对产物进行 了鉴定 ，并用薄层色谱对其分离。对影响麦芽糖基一一环糊精合成 的反应物摩尔 比(麦芽 糖／a一环糊精)、底物浓度 、反应温度 、反应时间、加酶量 、pH等 因素分别做 了单 因素实验 ，最终确定 了反应条件 ： 反应物摩尔比(麦芽糖／or一环糊精)为 16：1，反应 时间24h，反应温度为58℃，加酶量400U／gd一环糊精，pH4．5。 关键词 麦芽糖一一环糊精 ，麦芽糖 ，d一环糊精 ，普鲁兰酶 环糊精在食品、医药化妆 品、分析化学等领域被 1 材料与方法 广泛应用 。但是，母体环糊精一般溶解性较小 ，具有 一 定毒性 ，这就大大限制了其应用范 围 I3。分支环 1．1 材料与试剂 糊精是环糊精的衍生物 ，在环糊精分子的羟基上连有 普鲁兰酶 ，无锡杰能科公司；普鲁兰、麦芽糖-一 单糖或多糖的残基 ，这样可以扩大母体环糊精的亲水 环糊精 ，日本 WAKO公司 ；所有化学试剂均为分析纯 性 ，改善其溶解性 。近些年 ，对天然环糊精进行糖 (AR)；薄层层析硅胶 (GF254)，青岛海洋化工有限 基的侧链修饰 的科研工作在 国外得到重视并取得进 公司。 展 ，但国内才刚刚起步。 1．2 仪器 麦芽糖基一o一【环糊精 (Mal—oL—cycyclodextrin)是 仪- 101A2型干燥箱 ，上海市实验仪器总厂；JB．3型 环糊精在其葡萄糖残基的第 6位碳原子 的羟基上偶 磁力搅拌机 ，上海雷磁新径仪器有限公司 ；恒温水浴 联 1个麦芽糖残基的分支环糊精。其在水 中溶解度 锅，上海市实验仪器总厂；Waters600高效液相色谱 为43g／(100mL)，且无任何毒性与溶血性 ，如果能 仪 ；紫外检测器 LichrospherNH2(2．1×250mm)， 实现产业化生产 ，将对食品、医药等行业产生 巨大影 Waters公司 ；质谱仪 WatersPlatform ZMD4000，Wa- 响。麦芽糖基．．环糊精的合成与应用研究国外有过 ters公司。 报道 -6]，Naomi等人用麦芽糖基-一环糊精与 Caco一2 1．3 方法 细胞建立模 型，突 出了麦芽糖基一．环糊精 的无毒 1．3．1 酶 活力 的测定 性E73。Fukaya等人用麦芽糖基一一环糊精包合一种治 酶活力单位 定义 ：特定条件下 (pH 4．5，50 疗哮喘的药物 ，包合后药物利用率是原来 的数十 ℃)，从普鲁兰底物每分钟释放相 当于葡萄糖的 1个 倍 J，但是麦芽糖基一一环糊精相关研究在国内尚未 还原当量所需的酶量为 1个酶活力单位 (u)。 见过相关报道 。 测定方法 ：1mL原酶液用 50mmol的乙酸一乙酸 本课题组采用酶法合成麦芽糖基一-环糊精，并 钠缓冲液稀释至 1000倍 ，取 0．2mL酶液与 0．8mL 对其进行了简单的分离和结构鉴定 ，同时对影响产物 质量分数0．5％的普鲁兰缓冲液 ，在 50℃下反应 5 产量的各因素进行 了研究 ，填补了国内麦芽糖基一0一【 min，以Smogyi—Nelson比色法测还原糖 m 。 环糊精合成研究的空 白，为解决技术壁垒及国内进行 最终测定的酶活为452U／mL。 麦芽糖