血液分析仪检验PPT.ppt

第三章 血液分析仪检验;;第一节 血液分析仪的检测原理 现代血液分析仪综合应用了电学和光（化）学两大原理，用以测定血液有形成分（细胞）和细胞内容物（血红蛋白）。 电学检测原理包括电阻抗法和射频电导法； 光（化）学检测原理包括激光散射法和分光光度法。 激光散射法检测的对象有2类：染色的和非染色的细胞核、胞质颗粒等成分。; 2．射频电导法 高频电流能通过细胞膜，用高频电磁探针渗入细胞膜脂质层，测定细胞的导电性，提供细胞内部化学成分、胞核和胞质（如比例）、颗粒成分（如大小和密度）等特征性信息。 ; （二）光（化）学检测原理 1．激光散射法 将稀释、染色（化学染色或核酸荧光染色）、球形化的细胞悬液注入鞘液流中央，单个细胞沿着悬液和鞘液流; 当细胞（或颗粒）通过激光束被照射时，因其本身的特性（如体积、染色程度、细胞内容物大小及含量、细胞核密度等），可阻挡或改变激光束的方向，产生与其特征相应的各种角度的散 射光（表3-1）。放置 在石英毛细管周围不 同角度的信号检测器 （光电倍增管）可接 收特征各异的散射光 （图3-6） 。;;图3-8 光散射法血小板计数和红细胞计数散点图; 用于血液分析仪检测的染料分为荧光染料和非荧光染料。 荧光染料有：碱性槐黄、噻唑橙、噁嗪、聚亚甲基蓝和碘化丙啶等，主 要用于核酸染色，被激 光照射后产生荧光和散 射光，如采用荧光染料 和激光散射法原理进行 的网织红细胞计数（图 3-9） 。; 非荧光染料有： 亚甲基蓝（用于核酸染色） 氯唑黑E（用于单核细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞颗粒和白细胞的膜结构染色） 过氧化物酶试剂。 经过染色的细胞随鞘液流经激光检测区时，被染色部分可发生光吸收现象，使光检测器接收到的散射光强度发生改变，从而区分细胞的种类。; 2．分光光度法 主要用于血红蛋白测定。用于血红蛋白测定的溶血剂有2大类： ①改良氰化高铁血红蛋白溶血剂： 测定波长为540nm，稀释液含氰化物成分。 ②非氰化高铁血红蛋白溶血剂：即稀释液不含氰化物成分。如SLS-Hb法，测定波长为555nm。经HiCN法校准后，既可达到与HiCN法相当的精密度和准确性，又可避免HiCN法的试剂对检验人员的潜在危害和对环境的污染。; （三）血液分析仪检测原理的综合应用 1．VCS技术 在白细胞检测通道，红细胞被溶解，白细胞接近自然状态。应用VCS技术检测白细胞大小、结构特点等（表3-2），并形成三维散点图（图3-10，图3-11） 。 VCS技术检测病理性异常细胞的散点图位置见图3-12。;图3-10 体积（V）、电导（C）和光散射（S）法; 目前，该技术也可用于网织红细胞计数（图3-13）和有核红细胞的计数。如网织红细胞计数时，采用; 2．电阻抗、射频、流式细胞术和核酸荧光染色方法 （1）4DIFF通道：利用半导体激光流式细胞术、核酸荧光染色技术，采用溶血剂完全溶解红细胞和血小板，白细胞膜仅部分溶解。聚亚甲基蓝核酸荧光染料进入白细胞内，; （2）WBC/BASO通道：在碱性溶血剂作用下，除嗜碱性粒细胞外的其他所有细胞均被溶解或萎缩，经流式细胞术计数，可得到WBC/嗜碱性粒细胞百分率和绝对值及WBC/BASO散点图（图3-15）。; （3）未成熟髓细胞信息通道：采用射频、电阻抗和特殊试剂结合法。在细胞悬液中加硫化氨基酸，幼稚细胞膜脂质含量高，结合硫化氨基酸的量多于较成熟的细胞，对溶血剂有抵抗; 3．钨光源散射与细胞化学方法 （1）过氧化物酶染色通道：在白细胞通道加入溶血剂和POX染色剂，可计算MPXI，得到嗜酸性粒; （2）嗜碱性粒细胞/核分叶性通道：苯二酸完全破坏红细胞和血小板；除嗜碱性粒细胞外，其他白细胞膜溶解，胞质溢出，仅剩裸核。完整的嗜碱性粒细胞呈高角度; 根据多分叶核（PMN）和单个核（MN）的比例，可计算出核左移指数（LI）。LI越高，说明核左移程度越大。目前该技术也可用于有核红细胞的计数（图3-19）。; （3）未染色大细胞计数（LUC）检测：在POX通道，可检测到无POX活性、体积大于正常淋巴细胞体积平均值2个标准差的细胞，如异型淋巴细胞、浆细胞、毛细胞、幼稚淋巴细胞和原始细胞。; 4．多角度偏振光散射方法 多