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细 菌 染 色 技 术;细菌染色方法;常用的染色方法;常用燃料;染色方法的分类;普通染色法;革兰染色法（Gram Stain）;一、原理 细菌经结晶紫初染染成蓝色。G+菌细胞壁肽聚糖层数多，且肽聚糖为空间网状结构，再经乙醇脱水，网状结构更为致密，染料复合物不易从细胞内漏出，仍为蓝色。而G-菌细胞壁脂类含量多，肽聚糖层数少，且肽聚糖为平面片层结构，易被乙醇溶解，使细胞壁通透性增高，结合的染料复合物容易泄漏，细菌被脱色为无色，再经石炭酸复红稀释液复染成红色。 ;结晶紫初染; 用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫(crystal violet)。 媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和力或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落。 不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精(ethanol)。 复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，常用的复染液是番红。;三、结果: 阳性菌——紫色 阴性菌——红色 ; 固定 初染 媒染 脱色 复染 革兰氏阳性菌，用符号“G+”或“GP” （Gram’s Positive）表示。 革兰氏阴性菌，用符号“Gˉ”或“GN” （Gram’s Negative）表示。 ;四、影响因素;2.染液 染液用完后应及时盖上盖子，以免挥发影响染色效果 3.细菌因素 被检菌的培养条件、培养基成分、菌龄的不同等原因会影响染色结果，如培养时间过长革兰阳性菌可能染成阴性，所以被检菌的菌龄一般最好在18~24h之内。 某些细菌存在染色困难、不易脱色等情况，可能会出现染色不均，阴阳不定的现象。;五、临床意义;革兰氏阳性葡萄球菌例子 (金黄色葡萄球菌 x 1000);革兰氏阳性链球菌例子;革兰氏阴性杆菌例子 (大肠杆菌 x 1000);革兰氏阴性弧菌例子;革兰氏阳性产芽孢杆菌例子 ;革兰氏阳性短杆菌例子 (李斯特菌 x 1000);革兰氏阴性弯曲菌例子;革兰氏阳性棒状杆菌例子;抗酸染色法; 涂片固定 酸性复红初染 3%盐酸酒精脱色 美蓝复染 镜检;染色过程中的细菌颜色变化：;三、结果: 抗酸菌———红色； 非抗酸菌——蓝色。;抗酸染色注意事项;?? 抗酸染色的意义： 用以鉴别抗酸菌（如结核杆菌和麻风杆菌）和非抗酸菌。;荧光染色法;二、步骤：;三、结果: 阳性—明亮橘黄色荧光； 阴性—无荧光 ;三、临床应用： 荧光染色法敏感性强，效率高而且容易观察结果，在临床细菌鉴定中有很大的实用价值。主要用于结核分枝杆菌、麻风分枝杆菌、白喉棒状杆菌及痢疾志贺菌等的检测。 四、注意事项： 荧光染色法可以作为分枝杆菌的初筛实验，初筛阳性的须做抗酸染色确认。;特殊结构染色法; 细菌的某些基本结构如细胞壁、核质、胞浆颗粒和特殊结构如荚膜、芽孢、鞭毛等，用普通染色法不易着色，须用一些特殊染色法才能染上颜色。特殊染色法主要有荚膜染色法、鞭毛染色法、芽孢染色法、异染颗粒染色法等。这些染色法不仅能使特殊结构着色，还可使特殊结构染成与菌体不同的颜色，有利于观察和区别。 ;负染色法;墨汁染色法; 在细菌检验工作中，除异染颗粒染色法较常用外，由于其它特殊结构染色法操作费时，费用较高、染色过程要求非常严格，而普???染色法虽不能使特殊结构本身着色，但菌体着色后，荚膜和芽孢部分由于不着色也能显示出来，再加上特殊染色法比较复杂，故日常工作中较少使用这些特殊结构染色法。;特殊染色;质量控制;常见细菌图例;无乳链球菌;化脓链球菌;缺陷乏养菌;脑膜炎奈瑟氏菌;淋病奈瑟菌;产单核李斯特菌;红斑丹毒丝菌;奴卡氏菌;豚鼠/嗜水气单胞;类鼻疽单胞菌;巴斯德菌属;阴道加特纳菌;军团菌;产气荚膜梭菌;巴斯德菌;霍乱弧菌;新型隐球菌;布鲁氏菌;谢谢!！!