溶血剂在测定去白细胞红细胞中残留白细胞数的应用探讨.docVIP

精品论文 参考文献 溶血剂在测定去白细胞红细胞中残留白细胞数的应用探讨 张翙 苏武锦 （南宁中心血站　广西南宁　530003） 【关键词】溶血剂　去白细胞红细胞　残留白细胞 【中图分类号】R457.1 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）24-0163-01 使用白细胞滤器去除红细胞中绝大部分白细胞已被除广泛使用。去除白细胞的污染不仅可以降低非溶血性输血反应、巨细胞病毒等嗜白细胞病毒的传播，还可以减少HLA同种异体免疫反应。去白细胞红细胞悬液中的白细胞残留量要求le;2.5times;106/U，因此如何准确测定去除白细胞后的红细胞中残留的白细胞数是非常关键的。目前，国内一般质控实验室应用最普遍的是结晶紫染液按比例稀释样本后用 Nageotte计数板进行计数。但笔者在实际计数过程中遇到了红细胞碎片残留而干扰白细胞计数的问题，尝试着对此方法进行了改进，现报告如下： 1　材料与方法 1.1试剂和仪器 结晶紫染液[1]（自制）；溶血剂（雅培CD1800血细胞计数仪配套）；Nageotte计数（美国PALL）；普通光学显微镜（Olympus公司）、去白细胞悬浮红细胞（南宁中心血站）、白细胞滤器（长春泰尔茂）、移液器。 1.2 去白细胞红细胞中残留白细胞的检测 取20份去白细胞的悬浮红细胞（血比容为0.52～0.60）样本，分别抽取100mu;l样本加入50mu;l溶血剂的试管中反复吹吸数次，直至微量移液头不再吸附有红细胞，然后加入850mu;l结晶紫染液，混匀作10倍稀释。同时抽取100mu;l样本加入900mu;l结晶紫染液，反复吹吸数次，混匀作也做10倍稀释。在Nageotte计数池中加入上述混合液，于室温静置15分钟，在普通显微镜下计数1个大方格（50mu;l）白细胞数。每个稀释度平行操作3管，取平均值。白细胞数/mu;l=（计数池中白细胞数times;稀释倍数）/50mu;l。 1.3 统计学分析 实验数据以均值表示，加入溶血剂的和单纯使用结晶紫染液的白细胞计数结果用单因素方差分析LSD两两比较。 2　结果 20份样本两种方法计数1mu;l白细胞结果（见表1）。2种方法用单因素方差分析LSD两两比较，结果均无统计学差异（P＞0.05）。 表1 1mu;l白细胞均值结果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 溶血剂组 3.7 4.5 3.8 3.7 5.6 7.5 1.8 2.9 1.9 3.5 2.0 3.8 1.6 1.7 0.8 1.5 3.9 2.0 1.2 2.3 无添加组 2.9 4.3 3.5 3.7 5.4 7.6 1.7 2.5 1.7 3.1 2.4 2.9 1.5 1.6 0.9 1.8 4.3 2.3 1.1 2.3 表2 去白细胞红细胞中残留白细胞总量的结果比较 白细胞总量(times;105/U) P* 溶血剂组 6.03plusmn;3.37 P＞0.05 无添加组 5.81plusmn;1.65 3　讨论 从计数结果来看，两种方法无统计学差异（P＞0.05）。使用常规配备的结晶紫染液（含结晶紫0.01mg%W/V，醋酸7.7%V/V）[1]稀释样本后使用Nageotte计数板测定残留白细胞数的方法是目前国内血站系统应用最为普遍的微量白细胞计数方法，具有不需要特殊仪器和试剂、简单、快速和经济等优点，但仍存在结晶紫染液中的醋酸虽起到溶解红细胞的作用，但溶解程度低，以致在显微镜暗视野下仍有大量的红细胞碎片而干扰白细胞的计数的不足。而利用血细胞计数仪配套的溶血剂先将红细胞进行溶解，再使用结晶紫染液稀释后进行白细胞计数，可以溶解绝大部分红细胞，而不影响白细胞计数。这也是从血细胞计数仪计数白细胞的原理中得到了启发，血细胞计??仪白细胞计数的原理是利用溶血剂将一定倍数稀释的血液中的红细胞溶解，而白细胞质也经胞膜渗出，胞膜紧裹在细胞核和存在的颗粒周围，使白细胞成为“膜包核”状态被保留下来[2]。笔者在实际使用溶血剂中还发现了使用溶血剂后白细胞在显微镜下观察细胞核更清楚而易于与其他杂质如结晶物进行分辨。目前血细胞计数仪使用的溶血剂中包含有表面活性剂十二磺基硫酸钠代替了氰化物是无毒的，不会造成环境污染和实验人员的伤害。 综上所述，溶血剂在计数去白细胞悬浮红