多分DNA病毒在棉铃虫血细胞的表达及对前胸腺的影响研究.pdf

中文摘要 中文摘要 棉铃虫齿唇姬蜂(Campoletischlorideae)是棉铃虫(Ilelicoverpaarmigera) 的重要寄生性天敌。所在研究组在建立棉铃虫齿唇姬蜂一棉铃虫系统的基础上， 研究发现在棉铃虫齿唇姬蜂雌蜂卵巢内含有多分DNA病毒(Cc工V);CCTV可通过 蔗糖密度梯度离心分离纯化。作者在本组以前工作的基础上，通过电泳及 SouthernBlotting进一步研究了CCIV的分子构成及其在寄主体内的表达，构 建了CCIV的cDNA文库，筛选到了一个CCIV基因，同时还研究了CCIV对寄主重 要的内分泌器官— 前胸腺的影响，最后对5种夜蛾科幼虫作为棉铃虫齿唇姬蜂 室内繁殖寄主的情况作了初步的评估。结果表明: 1.CCIV的基因组含有20-21个DNA分子，大小3-26kbp不等。这些DNA分子 以非等摩尔数存在。在产卵后的第一天和第二天CCIV在寄主血细胞中大量表 达，之后表达量减少。CCIV的表达产物共11条带，大小从0.6kb到7kb，其 中以约1.0kb的基因表达量最为丰富。 2.取寄生第24h的寄主血细胞，提取RNA，通过一系列过程构建了CCIV的cDNA 文库，文库的滴度平均为2x10`pfu/mL，扩增后的滴定滴度达9,x109pfu/mL. 以TripLEx2载体插入子扩增序列为引物做PCR，然后进行Southern杂交，筛 选到一个CCIV基因，命名为CCIV1.0。通过Blast在GenBanK中比较，该 基因和索诺拉齿唇姬蜂仅,ampoletissonorensispolydnavirus)(CsIV)的 VHvl.4,VHvl.l相似性达88%，和WHv1.6,WHv1.0的干刚史当鑫89%,CCIV1.0 基因和CSIV的VHvl.4,VHvl.l相似性比VHv1.4,VHvl.l间的相似性还高 (VHvl.4,VHvl.l间的相似性为62%)。根据CCIV1.0基因序列推断其编码 的蛋白有一个半肤氨酸富含区，该区域由41个氨基酸组成，和CSIV的半肮氨 酸结构域基因家族的相似性很高，最高的达到90%以上，说明CCIV1.0基因 和CSIV的富含半肌氨酸基因家族可能来自同一个祖先。但和茧蜂的多分DNA 病毒序列及其半肤氨酸结构域没有相似性。 多分DNA病毒在腺铃虫血绷胞的表达及对前胸服豹彭响 3，在研究棉铃虫米龄幼虫前胸腺发育规律的基础上，采用体外注射方法研究了 CCTV对棉铃虫幼虫前胸腺的影响。光学显微镜下观察，注射3个雌蜂当量的粤 液或4个雌蜂当量的病毒使棉铃虫的前胸腺细胞失活并解体。透射电子显微 镜进一步观察发现，注射尊液或病毒使棉铃虫前胸腺细胞的细胞内通道系统明 显萎缩甚至消失，细胞内圆形线粒体增多，41酶体增多，环状的膜组织增多， 有些细胞的细胞器己经裂解，细胞内堆积有大量的颗粒状物质。 4.用5种夜蛾科幼虫饲养繁育棉铃虫齿唇姬蜂，比较了它们的寄生率、出茧率、 出蜂率和寄生蜂后代的性比。结果证祖*以粘虫为寄主时出蜂率最高。出于粘 虫可以群养，大大方便了寄生蜂的繁育，可作为该寄生蜂繁育的中间寄主。 关键词:棉铃虫齿唇姬蜂;棉铃虫;粘虫;多分DNA病毒 (PDV);尊液;基因 表达:前胸腺:cDNA文库;CCIVI.0;半肤氨酸结构域 英文摘要 CampoletischlorideaePolydnavirus:ItsExpressioninthe HaemocytesandEffectsontheProthoracicGlandsof Helicoverpaarmigera CongZhang(Zoology) DirectedbyProfessorChenzhuWangandAcademicianJundeQin Abstract Campoletischlorideae(Hymenopetera:Ichneumonidae)isoneofthekey parasitoidsofHelicov