连接酶链反应在人Amelogenin基因座检验中的初步研讨.pdf

型皇堇丕 生筮 塑 ·技 术 交 流 · 连接酶链反应在人Amelogenin基因座检验中的初步研究 宫荣彬 ，刘康武 ，缪 明。，徐 伟。，周 炜 (1．安徽省公安厅物证鉴定管理处，合肥 230061；2．安徽省淮北市公安 局，235000；3．安徽省淮南市公安局 ，232000；4．安徽省铜陵市公安局，244000) 摘要： 目的 建立连接酶链反应 (LigaseChainReaction，LCR)应用于法医学领域的初步方法探索。方法 选 择人 Amelogenin基 因座进行连接酶链反应。针 对人 染色体 Amelogenin基 因座 Xp22．1一．3、Ypl1．2上 M55418、M55419的序列，自行设计特异引物，建立 LCR最佳体 系，对男性和女性 Amelogenin基因座进行分 型。结果 巢式LCR能够对男性和女性 Amelogenin基因座正确分型。结论 LCR技术能够应用于人 Amelogenin基因座分型，但 尚需进一步简化和改进 。 关键词： 连接酶链反应；Amelogenin基 因座 中图分类号：DF795．2 文献标识码：A 文章编号：1008—3650(2013)01—0035—03 LigasechainreactionassayforgendertypingtestofhumanAmelogeninlocus GONG Rong-bin，UU Kang—wu，M IAOM ing，eta1．(P SecurityDepartmentofAnhuiProvince，Hefei230061， China) ABSTRACT： 0bjective ToexploretheforensicapplicationofLigaseChainReaction(LCR)．Methods ThehumanAmelo— geninlocuswasselectedforLCIL AccordingtothesequencesofM55418onthehumanAmelogeninchromosomelociXp22．1—3， andM55419onYpl1．2，theprimerswasdesignedandtheLCRsystem wassetupforgenotypingmaleandfemale．Results The genotypesofmaleandfemaleAmelogeninlocicanbegetbynestedLCR correctly．Conclusion LCR canbeappliedtohuman Amelogenin1OCUSgenotyping． KEYW ORDS： ligasechainreaction(LCR)；Amelogenin1OCUS 连接酶链反应 (LigaseChainReaction， )是继 材 48份，分别采用 Chelex法或有机溶剂法提取 聚合酶链反应 (polymerasechainreaction，PCR)之后发 DNA。(2)已知样本：取 6名男性和两名女性的血液 展起来的一项具有 良好应用前景的DNA扩增技术_1]。 各20％L，用Chelex法提取 DNA。(3)对照样本：男 它在热稳定的 A连接酶的作用下，通过连接与模板 性样本 9948，lng／~L；女性样本 9947A，Ing／#L；阴 DNA互补的两个相邻寡核苷酸链，能够快速进行 A 性对照：水 。 片段扩增。若相邻两个寡核苷酸接头处与靶核苷酸之 1．2 试 剂 间即使有一个碱基错配，也不能被连接和扩增。 TaqDNA连接酶 (纽英伦生物技术北京有限公 目前，LCR因其应用于DNA扩增，同时能够区 司)，TaqDNA聚合酶、dNTP(上海生工)，GENMED 别单个位点的碱基突变，在 国内外医学领域得以发 超声化鲑鱼精单链 DNA(sssssDNA，上海杰美基因 展，在诊断遗传性疾病和某些感染性疾病 (如病毒或 医药科技有限公司)。 支原体感染)上取得 了很好的效果_2_引，同时为分子生 引物 设 计 ：主 要 针 对 AmelX