石斛合剂对糖尿病模型大鼠胰岛细胞凋亡及P53mRNA表达的影响.docVIP

精品论文 参考文献 石斛合剂对糖尿病模型大鼠胰岛细胞凋亡及P53mRNA表达的影响 (1.福建中医药大学附属第二人民医院病理科，福建 福州 35O003； 2. 福建中医药大学中西医结合学院 ，福建 福州350l08； 3.江苏省泰州市人民医院内科，江苏 泰州 225300) 基金项目：国家自然科学基金资助项目;福建省自然科学基金资助项目（C510025） 摘要：目的 研究石斛合剂对高糖高脂+STZ造模糖尿病大鼠胰岛细胞凋亡及相关基因P53mRNA表达的影响。方法 大鼠高脂高糖饲养1月后腹腔注射STZ制备糖尿病模型，经石斛合剂治疗2周后检测胰岛细胞凋亡及P53mRNA表达。结果 石斛合剂可显著地降低糖尿病大鼠空腹血糖(Plt;0.05或Plt;0.01)；显著减少糖尿病模型大鼠胰岛细胞凋亡(Plt;0.05)，减少P53mRNA表达(Plt;0.05)。结论 石斛合剂降低血糖,减少大鼠胰岛细胞凋亡，其可能与其降低糖尿病模型大鼠胰腺组织P53表达有关。 关键词：石斛合剂； 细胞凋亡； 糖尿病； 大鼠 糖尿病患病率逐年上升，流行病学调查表明，全国ge;2O岁人群DM患病率为9.7％，且糖耐量异常人群远远超过确诊的DM患者［1］。开发治疗糖尿病中药，临床应用前景可观。本课题组既往研究证实石斛合剂能显著降低实验动物高血糖,调节胰岛素分泌、升高胰岛素/C肽比值,降低血酯、FFA水平,且应用于临床后证实该方降糖疗效确切。本研究通过建立高糖高脂+STZ造模糖尿病大鼠模型，观察石斛合剂对胰岛细胞凋亡及凋亡相关基因P53表达的影响，探讨其治疗糖尿病的机制。 1 材料与方法 1．1 实验动物及药物、试剂 清洁级健康Wistar大鼠50只（上海斯莱克实验动物有限公司），3月龄，雌雄各半，体重140～160g。石斛合剂(福建中医研究院药厂制备，批号：010615，生药含量：2.0 gmiddot;mL-1)。STZ(Sigma公司美国)；血糖试剂盒(南京建成)；Oligd(T) (上海博亚)；M-MuLV反转录酶(Fermentas公司美国)；TRIZOL、DEPC、PCR引物、TaqDNA 聚合酶(上海生工)。 1．2 分组及给药方法 Wistar大鼠50只，适应性喂养1周，随机分为正常对照组10只、糖尿病模型组（模型对照组10只、石斛合剂低、中、高剂量组各10只）。大鼠高脂高糖饲养1月后腹腔注射STZ(30mg)制备糖尿病模型。 正常对照组：给予NS灌胃(0.1 mLmiddot;kg-1 )2周；模型对照组：给予NS灌胃(0.1 mLmiddot;kg-1 )2周；石斛合剂低、中、高剂量组：石斛合剂7.5、15、30 gmiddot;kg-1灌胃2周。实验过程模型组死亡２只，各剂量组各死亡一只。实验结束后用乙醚麻醉，腹主动脉取血，并取胰腺组织备测。 1.4 观察指标及检测方法 1.4.1 一般情况观察及生化指标检测　　观测大鼠进食量、饮水量、精神状态、毛色、活动及排尿量、每周体重改变。空腹血糖(FBC)采用葡萄糖氧化酶法测定。 1.4.2 TUNEL法检测细胞凋亡 胰腺组织石蜡包埋3mu;m连续切片。常规脱腊、水化，蛋白酶K室温孵育15min。3%H2O2孵育10min,高压修复2min,血清封闭20min,后加50mu;L的TUNEL反应混合溶液,湿盒中37℃孵育60min，PBS冲洗，滴加转化剂POD，37℃孵育30min，每张切片加100mu;LDAB液,显微镜下控制染色时间。阴性对照用PBS代替TUNEL反应液。结果判定:细胞核中有棕黄色颗粒者为阳性。切片于20倍物镜下观察,计算每个胰岛内凋亡细胞数。 1.5 统计学方法 数据资料采用SPSS for Windows 19统计软件包进行统计，结果用表示，多组间比较采用单因素方差分析，2组间比较用t检验。检验水准alpha;=0.05。 2 结果 2.1 石斛合剂对糖尿病模型大鼠空腹血糖的影响　　与 模型对照组血糖29.35plusmn;3.24 mmolmiddot;L-1比较，石斛合剂治疗各剂量组血糖（23.97plusmn;1.24、20.93plusmn;4.38、23.16plusmn;4.06 mmolmiddot;L-1）均有显著性下降(Plt;0.05或Plt;0.01)，但未降至正常（4.99plusmn;0.92 mmolmiddot;L-1Plt;0.01），治疗各剂量组之间差异无统计学意义（Pgt;0.05）。 2.2 石斛合剂对大