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多糖分离纯化研究进展 王彪 s06071005296 多糖作为提高机体免疫功能的保健品已被许多人接受，，，，，，，，，，，，，， 2.1. 多糖的分离提取方法 多糖的分离纯化方法很多，（） ，（） ，，，，，6～8h。经脱脂后的原料，，: 2.1.1. 热水提取法 这是目前多糖提取中最常用方法。它是根据大多数多糖在热水中溶解度较大的性质进行提取。多糖在热水中是稳定的，，2～6 h。提取液如粘度不大，;对于粘度大的提取液则必须采用离心法去残渣。有的多糖粘度大，2%～10%的尿素溶液，（），， 2.1.2. 稀碱水溶液提取法 有的酸性多糖，，，， 5%～15%的NaOH溶液或Na2CO3溶液提取。不过用稀碱溶液提取时，10℃以下，，， 2.1.3. 酶解法 将已粉碎的植物悬浮于水中， 复合酶作用的最适条件，（38～50℃） ，pH（318～415） ，5%～25%复合酶，4h，，（） ，，， 2.1.4. 其他方法 上述三种方法是多糖提取中较常用的方法，，- 二甲氧基乙醇提取多糖，， 2.2.　多糖提取液中杂质的去除 采用上述分离方法获得的多糖提取液，，（），36h ，，2～3h（2次） ，，，（）（）pH5～9时稳定，pH至5～9后才可进行透析。透析袋较昂贵，，，，，，（）， 提取液中蛋白质的除去通常采用四种方法:（1）:即采用蛋白酶将提取液中的蛋白质酶解。常用链霉蛋白酶（pronase），pH7～8时，，372～4d ，5min以阻断反应。（2）Sevag:根据蛋白质在氯仿等有机溶剂中变性的特点，1/5 体积加入（pH是4～5），1/5的正丁醇，20min，，，，，，5 次左右方能去尽蛋白。该法常用于微生物来源的多糖去蛋白。（3）:等体积的三氟三氯乙烷加入到提取液中，10min ，，2次，，（56） ，，，（4）:在冰浴中搅拌的情况下缓缓加入15%～30%三氯醋酸于提取液中，（4）4 h。离心除去沉淀即得无蛋白质的多糖提取液，，，，， 多糖提取液，，，，，，，，，，，，，，0.3%～0.8%粗多糖水溶液用浓氨水调pH至8，，50℃逐渐加入过氧化氢（10%～30%）50℃下保持2h，pH7.0 ，，3倍量乙醇沉淀，，pH等。尽管如此，，，，，[79 ] 。 多糖提取液中杂质的去除，，（） 2.3. 多糖的纯化 所谓多糖的纯化是将分离所得的混合多糖纯化为各种单一的多糖。实质上，，（，，） （）2.3.1. 分步沉淀法 它是根据不同的多糖在低级醇或酮（）（），（） :在多糖混合物的溶液中在搅拌下缓缓加入98%以上的乙醇，25%，1h，，，，35% ，1 h ，，，50%及70% ，，，，，pH应呈中性。应该说多糖浓度越小，，，，0.25%～3%。分步沉淀在多糖纯化中特别在保健品开发中常常首先使用， 2.3.2. 盐析法 它是根据分子量不同的多糖在一定浓度的盐溶液中具有不同溶解度的性质分离各种多糖。在多糖中加入中性盐（NaCl、KCl、（NH4）2SO4），，，（PSK），，，，，pH 及盐析温度。为了获得满意的实验重复性，pH及温度均必须严格控制。盐析剂很多，，， 2.3.3. 金属络合法 根据不同多糖能与各种铜、钡、钙和铅离子形成络合物而沉淀的性质进行多糖的纯化。常用的络合剂有氯化铜、氢氧化钡和醋酸铅等。得到的络合物沉淀经水充分洗涤后，，，CuCl2、CuSO4、Cu（Ac）2Feling 试剂。这些试剂需过量使用，Feling试剂不能过量，，5% HCl（VPV），Ba（OH）2，，Ba（OH）20.03mol·L-1时，，，（2 molL-1）， 2.3.4. 有机盐沉淀法 2000年美国专利（US75920000111），， 2.3.5. 季胺盐沉淀法 根据长链季胺盐能与酸性多糖或长链高分子量多糖形成络合物，，，，，（CTAB）（CTABOH）（CPC），pH。溶液的pH应小于9，，，（0.01%的浓度），3～4mol·L-1的NaCl溶液中，3～5倍的乙醇使多糖沉淀，;或在3～4mol·L -1的NaCl溶液中加入碘化物或硫氰酸盐使季胺盐沉淀出来，，，， 2.3.6. 柱层析方法 柱层析方法是目前多糖中应用最多的方法，， 2.3.6.1. 纤维素柱层析 柱中的载体是纤维素。先用乙醇液将柱内纤维素平衡好，（80%，60%，40%，20%），，，，，，，，，，，32g硅藻土与500mL0.2 mol·L-1CaCl2溶液相混，640mL0.2mol·L-1K2HPO4溶液，，，0～0.2 mol·L-1不同离子强度的磷酸缓冲液（pH65），， 2131612 　阴离子交换柱层析 这是目前多糖纯化中也是柱层析中应用最普遍的一种方法，，，（） （DEAEcellulose），DE2AE（DEAESephadex）DEAE琼脂糖（