组织工程化人工骨修复兔桡骨骨缺损.docVIP

精品论文 参考文献 组织工程化人工骨修复兔桡骨骨缺损 曲志强 陈微微 魏东岩 刘思佳 杜鹏 刘海霞（内蒙古通辽市医院骨三科 内蒙古通辽 028000） 【中图分类号】R68 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）12-0137-02 制备磷酸钙骨水泥(CPC)与骨髓基质干细胞(BMSCs)、重组人骨形态发生蛋白-2(rhBMP-2)、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）复合物,通过动物实验研究其对骨缺损的修复作用。 1 CPC与rhBMP-2、bFGF复合 把rhBMP-2和bFGF,按适当比例加入CPC固化液中,充分混匀。将CPC粉末与含bFGF、rhBMP-2的固化液按固液比mp/vl=4g：1ml在玛瑙研钵中充分调和成糊状,制成直径10mmtimes;4mmtimes;4mm的长方体片,每片含rhBMP-2 400ug、bFGF 60ng。 2 CPC、rhBMP-2、bFGF复合物与骨髓基质细胞的复合 把上述制备成的直径10mmtimes;4mmtimes;4mm的长方体片,每片含rhBMP-2 400ug、bFGF 60ng 浸入制备好的单细胞悬液中，共同培养12小时。 3 试验动物分组 健康成年新西兰大白兔8只,体重2.5～3.5kg,雌雄不限,按随机化原则分为4组,CPC／BMP／bFGF/MSC组2只,CPC／BMP/bFGF2只,CPC/BMP/MSC组2只、空白对照组2只，每只均为双侧植入。 4 植入动物 兔耳缘静脉麻醉。双侧上肢剪毛，碘酒消毒三遍，酒精脱碘，铺无菌洞巾。严格无菌操作下行双侧前肢前臂纵切口,显露双侧桡骨中段，于桡骨干中1/3处,切除桡骨干10mm(含骨膜),造成桡骨干节段性骨缺损模型，大小为10mmtimes;4mmtimes;4mm。以等渗盐水冲洗创口后，分别植入CPC／BMP／bFGF/MSC、CPC／BMP/bFGF、CPC/BMP/MSC等复合材料，空白对照组不植入任何材料，逐层缝合创口。术后分笼饲养,常规饮食，不加外固定，每只肌注青霉素40万单位,1次/日,连续3d。 5 术后观察 5.1大体观察 术后观察动物活动，刀口反应，缺损区有无新骨生成和炎症反应，骨痂生长情况，缺损区充填组织的完整性、质地、程度和范围等。 5.2 X线观察 分别于术后4、8、12周行动物双侧前肢X线正位片检查，观察植入组织与宿主骨界面的结合情况以及骨缺损的修复情况，各组进行对比。 5.3组织学观察 于术后12周行空气栓塞处死动物，取桡骨缺损处新生组织，置10%福尔马林液中固定,硝酸脱钙1周,石蜡包埋,切片,HE染色，光镜观察。 5.4扫描电镜观察（SEM） 于术后12周取桡骨缺损处骨组织，经3%戊二醛固定,PBS液冲洗,丙酮梯度脱水、乙酸异戊酯置换，临界点干燥，表面喷金后扫描电镜观察缺损区新骨生长情况以及生物活性玻璃材料降解情况。 5.5抗折强度测试 术后12周时, 将两侧取出的植入材料在IN STRO 134 型万能材料试验机上作抗折强度测试, 加载速度为015mm ouml;m in, 记录测试数据以作比较, 并进行统计学处理。 6 实验结果 6.1大体观察 术后12周时Ⅰ组桡骨缺损区骨髓腔均再通,与邻近正常骨色泽无差异；Ⅱ、Ⅲ组骨缺损初步修复,大部分骨髓腔再通，有少量连续性骨痂通过骨折断端；空白对照组弯曲变形，形成假关节。 6.2X线观察 术后12周Ⅰ组骨缺损完全修复，其密度接近正常骨，可见皮质骨及髓腔形成，皮质骨厚度接近正常骨；Ⅱ、Ⅲ组骨缺损初步修复,无明显骨髓腔再通，有少量连续性骨痂通过断端，骨质疏松，Ⅱ组较明显；Ⅳ组骨折断端硬化分离，有少量反应性骨痂，缺损区未出现桥接，且弯曲变形，形成假关节。 6.3组织学观察 术后12周，Ⅰ组见大量新生骨组织，骨小梁规则，连接成片，皮质骨形成，骨髓腔再通，出现脂性骨髓，人工骨材料已大部分降解；Ⅱ组、Ⅲ组骨缺损区见有少量新生骨组织，有骨小梁形成，但不能连接、贯通，Ⅲ组比Ⅱ组新生骨组织稍多，骨小梁生成也较多；Ⅳ组缺损区，只在断端间有少量新骨生成，周围被纤维结缔组织填充。 6.4扫描电镜观察 术后12周，Ⅰ组骨缺损区见骨细胞基质成熟,位于骨陷窝内,核大,细胞器少。成骨细胞内可见大量丰富扩