FBD防治血管性痴呆物质基础与药效相关性研讨.pdf

FBD防治血管性痴呆的物质基础与药效相关性研究 摘 要 当归芍药散(DangguiShaoyaoSan,DSS)出目 金《医要略》，由当归、白 芍、川i}I获菩、白术、泽泻6味药组成，具有泻肝补血、健脾利湿功效， 近年来用于防治老年性痴呆取得良好的效果。我研究室寇俊萍老师对当归芍 药散防治老年型痴呆的主要药效以及作用机理进行了较深入的研究，林志宏 硕士对该方进行优化设计，得到当归芍药散防治血管性痴呆的精简方 - FBD (获答:白术:当归=10:5:3)0 为了深入探讨FBD防治血管性痴呆的物质基础与药效相关性，本论文结 合药理、化学、与生物学方法，对FBD化学部位以及化学成分进行了较为 系统的研究，主要工作如下: 应用东蓑若碱、亚硝酸钠与脑反复缺血再灌注制备小鼠记忆障碍模型 低亚硫酸钠 (Na2S20a)与谷氨酸钠 (MSG)分别诱导PC12细胞缺氧损伤和 兴奋性氨基酸损伤模型，利用动物行为学与血清药理学相结合的方法，筛选 FBD防治血管性痴呆有效部位，并结合生产工艺成本的实际情况，确定粗多 糖部位 (Polysaccharide,Ps)+正T醇萃取部位 (n-BuOHrfaction,nBu)为 FBD有效部位组合。 应用东蓑蓉碱、亚硝酸钠、脑反复缺血再灌注诱发小鼠记忆障碍模型以 及颈内动脉注血栓诱发大鼠多发梗塞性痴呆模型研究有效部位组合(Ps十 nBu)对多种因素诱导的动物记忆障碍的影响，证实Ps+nBu对东蓑若碱、亚 硝酸钠诱发的小鼠记忆获得与巩固障碍有明显的改善作用，其中对东蓖著碱 模型可通过抑制胆碱酷酶发挥作用;Ps+nBu可以增加脑反复缺血再灌注模 型小鼠大脑中SOD活性，减少MDA含量，从而发挥对脑缺血引发的记忆障 碍的改善作用;Ps十nBu也可以减轻多发梗塞性痴呆大鼠的行为障碍，减少 脑梗塞面积，改善记忆损伤。 脑部缺血再灌会产生大量自由基，危害最大的是O·H自由基。应用Fenton 反应产生OH自由基，研究有效部位清除O·H自由基能力，实验发现FBD 以及有效部位Ps与nBu对O·H自由基有一定的清除能力，相同生药剂量下， Ps优于nBu，两者合用显现协同增效作用，提示清除-OH 自由基是FBD与 有效部位发挥脑保护作用的机制之一。 FBD防治血管性痴呆的物质基拙与药效相关性研究 应用Na2S204,KCl分别诱导PC12细胞缺氧损伤和CaI十超载损伤模型， 研究发现Ps与nBu对PC12细胞缺氧、Ca十超载损伤有明显的改善作用，两 者合用在低剂量下对PC12细胞缺氧损伤的改善作用有一定的协同性，高剂 量下以及对Ca`超载损伤并没有表现出协同性，这可能是因为化学部位成分 复杂，在高浓度合用时，某些物质能竞争性结合有效成分在细胞膜上的作用 靶点，反而掩盖药效。Ps+nBu含药血清对PC12细胞缺氧和钙超载损伤均 有明显的改善作用，说明Ps,nBu中的有效成分能够吸收入血发挥作用。 由于血脑屏障的存在，血清药理学实验方法在研究中枢神经系统药物方 面具有局限性，本研究初步摸索FBD及其有效部位 “脑脊液药理学”实验 方法，确定一次灌胃给予FBD后2小时是大鼠CSF最佳采集时间，10%浓 度是CSF作用PC12细胞的最佳浓度，发现相同提取物给药剂量下得到的含 药CSF中nBu部位比Ps部位对损伤的PC12细胞的改善作用更为明显，提 示真正能够穿过血脑屏障发挥作用的活性成份很可能存在于nBu部位中。Ps 部位多为大分子物质，如多糖、蛋白，它们不易透过血脑屏障，但可能是通 过其它途径参与脑保护和改善记忆障碍的作用。 体外实验发现，阿魏酸0.5L[M--500PM对大鼠原代神经细胞(PCCN)缺氧 损伤、兴奋性氨基酸损伤、以及OH自由基损伤都有显著的改善作用，白术 内酷1110.04PM-4AM与获荃素。.001一。.O1Pg/ml可显著改善谷氨酸钠诱导 PCCN兴奋性氨基酸损伤，获荃素在较高浓度下((0.1wg/ml以上)效果较差， 显示其在低浓度下能发挥脑保护作用。本研究为阿魏酸、白术内酷、获荃三 菇作为FBD防治血管性痴呆的质量标准提供了理论依据，并提示我们利用 体外神经细胞培养技术可以做为寻找新的神经保护剂的筛选平台。 Ps影响脑通透性试验显示Ps对正常小鼠血脑屏障通透性没有明显影响， 说明其并不能促进nBu部位中小分子成分穿过血脑屏障。Ps100mg