IDA型固定化金属离子为亲和配基的微米级超顺磁性聚丙烯酸甲酯高分子微球的合成和表征研究.pdf

L029 IDA 型固定化金属离子为亲和配基的微米级超顺磁性 聚丙烯酸甲酯高分子微球的合成和表征 马志亚 官月平 刘先桥 刘会洲 （中国科学院过程工程研究所、分离科学与工程实验室、生化工程国家重点实验室，中国科学院研究生院， 北京100080） 要 采用改进的悬浮聚合法合成了 IDA 型固定化金属离子为亲和配基的微米级超顺磁性高分子微球。 首先在油酸包覆的亲油性磁性四氧化三铁纳米颗粒存在下通过改进的悬浮聚合法合成了微米级磁性聚丙烯 酸甲酯微球（mPMA ）；然后通过氨解反应和羧甲基化反应在微球的表面引入了亚胺二乙酸（IDA ）螯合基 团；最后与铜离子螯合，制得了以铜离子为亲和配基的mPMA 微球。考察了其对牛血红蛋白 （BHb ）的亲 和吸附性能。采用扫描电镜 （SEM ）、振动样品磁强计 （VSM ）和傅立叶红外光谱 （FTIR ）对合成的磁性 高分子微球进行了表征。mPMA 微球的平均粒径为5 m，具有超顺磁性。此磁性高分子微球具有合成工艺 简单、价廉、适合大规模制备的特点，在蛋白质的大规模分离 有广阔的应用前景。 关键词 磁性高分子微球 聚丙烯酸甲酯 固定化金属离子 IDA 蛋白质分离 引 言 磁性分离技术具有分离迅速、操作简便的特点，在生物工程和生物医学领域得到了广泛 的应用[1~3] 。它可从未经处理的物系 直接分离出目标产物，而且易于清洗，这是传统生 物分离无法做到的。然而磁性分离目前主要应用在细胞分离、核酸纯化等实验室小规模领域， 在蛋白质大规模分离 的应用较少。主要原因是缺少适合大规模制备磁性载体的方法和合适 的亲和配基。磁性高分子微球因其表面可带有多种功能基团，在磁性分离 得到了广泛的应 [4] 用。磁性高分子微球的制备方法主要有包埋法 和单体聚合法。包埋法操作简单，但合成的 磁性微球粒径分布宽，形状不规则，磁含量不均一。目前应用较多的是单体聚合法，包括悬 [5,6] [7] [8] 浮聚合 、乳液聚合 、分散聚合 等。其 悬浮聚合法相对容易操作且适合大规模制备， 但通常的悬浮聚合法合成的磁性高分子微球的粒径较大（几十至几百微米）且粒径分布很宽。 采用悬浮聚合法制备微米级磁性高分子微球少有报道。而适合蛋白质分离的磁性微球粒径最 好在1~ 10 m 。与传统的生物亲和配基（如抗体、抗原）等相比，固定化金属离子亲和配基 具有价廉、性质稳定、偶联容易等优点，近年来在生物分离 得到了广泛的应用。固定化金 属亲和分离是利用Cu2+ 、Ni2+等过渡金属离子和蛋白质表面的组氨酸、色氨酸或半胱氨酸等 [9] 配位结合，选择性加以分离的方法 。将金属离子固定在磁性载体上用于蛋白质分离，结合 [10,11] 了磁性分离和固定化金属离子亲和分离的优点，得到了广泛关注 。 本文采用改进的悬浮聚合法制备微米级聚丙烯酸甲酯磁性高分子微球，通过氨解反应和 羧甲基化反应在微球的表面引入了亚胺二乙酸（IDA ）螯合基团，螯合Cu2+后用于牛血红蛋 白的亲和吸附。用SEM 、VSM 及FTIR 对合成的磁性高分子微球进行了表征。 1 实验材料与方法 1.1 实验材料 未加说明，所有试剂购自北京化学试剂公司。单体丙烯酸甲酯（MA ）和交联剂二乙烯 苯 （DVB ）经减压蒸馏去除阻聚剂。聚乙烯 （PVA-1788）为稳定剂。过氧化苯甲酰 （BPO ） 为引发剂。氯化亚铁（FeCl 4H O ）、氯化铁（FeCl 6H O ）、油酸、浓氨水 （25wt% ）、氯乙 2 2 3 2 酸、乙 胺（EDA ）、 甲基甲酰胺（DMF ）、硫酸铜 （CuSO 5H O ）均为分析纯试剂。牛 4 2 血红蛋白 （BHb ）购自Sigma. 水为去离子水。 1.2 实验方法 1.2.1 制备油酸包覆磁流体