接触速度，接触时间以及加载率对力作用下PselectinPSGL1键解离的影响研究.pdfVIP

中科院力学所博士后工作报告 摘要 摘要 在炎症反应中，白细胞在血液流动动力和粘附分子的作用下在血管内皮上 的滚动，是白细胞从流动的血液中浸润、迁移到炎症部位整个过程的第一步。白 细胞在内皮细胞上滚动由选择素分子与其配体分子相互作用所导致，其中P选 择素分子 (P-selectin)与其对应的P一选择素糖蛋白配体·l(PSGL-1)的相互作 用起着重要的作用。 许多研究者用流动腔、微吸管和原子力显微镜 (AFM)等实验技术对 P-selectin/PSGL-1相互作用的动力学进行了深入和广泛的研究，其中对不同加载 率下键解离的认识已比较清楚。然而P-selectin和PSGL-1分子间相互作用时不同 接触速度、接触时间等因素对分子间相互作用所形成的复合体是否有影响，也即 分子间形成的键的强弱如何，键的寿命长短怎样等，都未做过相应的研究。在本 文中，用原子力显微镜研究不同接触速度、接触时间、以及不同解离速度下 P-selectin/PSGL-1键解离时的断裂力分布和最可几值. PSGL-1从人中性粒细胞中提取纯化，通过脂质体的构键和脂双层在有高分 子垫层的玻璃上铺展，使PSGL-1锚定在脂双层上。通过物理吸附在探针表面上 的捕获抗体S12捕获溶解态P-selectin(sPs)分子。AFM粘附测试循环包括三个时 相:1)靠近相;2)接触相:3)分离相，每个点做60次粘附实验。同时得到粘 附概率和键的断裂力。 实验结果显示P-selectin/PSGL-1断裂力是一随机的正态分布，其峰值随着解 离时加载率的增加而增大，最大值为164pN，与他人的实验一致。分子以不同 速度 (50-1000nnt/s)接触，然后以相同的加载率解离，断裂力的分布和最可几 力没有变化。分子间以不同的时间(0.05-3s)接触，然后以相同的加载率解离， 断裂力的分布和最可几力与接触时间不相关。在本实验条件下不同接触速度和接 触时间对P-selectin/PSGL-1相互作用所形成键的强度没有影响。其主要原因可能 与形成的键数目很少(甚至是单键)以及实验所采用的接触速度和接触时间范围 不足够大有关。 姜教iI.:p洗择素，P_洗择素糖蛋白配体一1,原子力显微镜，加载率，断裂力 中科院力学所博士后工作报告 摘要 ABSTRACT Leukocytesrollalongtheendotheliumofpostcapillaryvenulesinresponseto inflammatoryandthromboticprocesses.Therollingunderhydrodynamicshearforces isafirststepindirectingleukocytesoutofthebloodstreamintositesofinflammation, whichismainlymediatedbybindingofselectins,afamilyofextended,modular,and calcium-dependentlectinreceptors,totheircounterpartligand- P-selectin glycoproteinligand-I(PSGL-1).KineticsofP-selectin/PSGL-1interactionswas extensivelystudiedbyusingsuchthestate-of-the-arttechniquesasflowchamber, micropipetteaspiration,andatomicforcemicroscope(AFM).Littlehasbeenknown abouttheeffectsofapproachingrateandcontactdurationonforceddissociationof P-selectin/PSGL-1bonds.Inthispaper,weexploredtheruptureforcedistribution, usingtheAFM,ofindividualP-selecdn/PSGL-1bondsondifferentapproachingr