HPLC法测定红芪药材中红芪多糖的含量研究.pdfVIP

甘肃省化学会第二十五届年会论文集 一79一 HPLC法测定红芪药材中红芪多糖的含量 封士兰‘，胡芳弟，李冰，刘小花，马 丹， 李晓东 (兰州大学药学院，甘肃兰州 730000) 摘要：目的：建立红芪药材中红芪多糖的含量测定方法。方法：用I-IPLC法、蒸发光散射检测器 测定红芪多糖的含量。结果：红芪多糖I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组成均为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、 芪药材中红芪多糖的含量。 关键词：红芪；多糖；含量测定；加?LC 红芪为豆科植物多序岩黄芪(HedysariimPolys—Mazz)的干燥根【lJ，与黄芪同科异属，临床常与 黄芪通用。自1985年版《中国药典》开始，将红芪单列为一种中药。红芪为甘肃省地道药材，分布 于我省宕昌、通渭、漳县、岷县、武都、渭源等地，具有补气固表、利尿排毒、排脓、敛疮生肌补 气等作用【l】，可治疗慢性肾炎蛋白尿、糖尿病…等．。本文用水煎煮红芪药材、过滤、浓缩、醇沉得 到红芪粗多糖，再除蛋白、除色素得到纯化多糖，然后将纯化多糖水解制成糖睛乙酸酯衍生物，用 GC法测得红芪药材中红芪多糖的组成为鼠李糖、阿拉伯糖、木糖、葡萄糖、半乳糖，各单糖的百分 比见表1。 表l红芪多糖中5种单糖组成 多糖的含量测定常用的方法是苯酚．硫酸比色法‘31、硫酸一葸酮比色法141等，这些方法稳定性和选 择性都较差，且对仪器的灵敏度和操作者的实验技能要求较高，因此影响实验结果的准确性。目前 未见文献报道用HPLC法测定红芪多糖的含量，本文用HPLC法、ELSD测定了红芪药材中红芪多糖的 含量，结果重现性好，稳定，分析速度快，此方法的建立为红芪多糖的进一步研究奠定了基础。 1仪器与试剂 美国Waters 柱温箱，Shodex 2000，美国)，离心机 sugarSP0810柱(日本昭和)，Alltech蒸发光散射检测器(ELSD 葡萄糖对照品(购自中国药品生物制品检定所)，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 2方法与结果 2．1多糖的制备取红芪干燥根，加95％乙醇，加热回流2小时。药渣干燥后加水煎煮三次，合并 煎煮液并浓缩，将浓缩液分为两份：～份加入乙醇使乙醇浓度为30％，静置4h后离心，取沉淀冷冻 干燥得多糖I；上清液再加乙醇使乙醇浓度为50％，静置离心，取沉淀冷冻干燥得多糖Ⅱ；上清液再 加乙醇使乙醇浓度为70％，静置离心，取沉淀冷冻干燥得多糖Ⅲ。另一份加入乙醇使乙醇浓度为70％， 静置4h后离心，取沉淀冷冻干燥得多糖Ⅳ，四种多糖样品分别溶于蒸馏水中，各加入胃蛋白酶， 37℃酶解，离心，弃去沉淀，上清液除蛋白，除色素得各四种纯化红芪多糖。 2．2色谱条件Shodex sugar 15℃。 0．85ml／min，载气流速3．2L／rain，漂移管温度1 2．3对照品溶液的制备精密称取葡萄糖对照品15．4mg，加水溶解定容至10ml，作为对照品溶液。 E-mail：fsllzyxy@public．1z．gs．cn 一80一 甘肃省化学会第二十五届年会论文集 H2S0480ml，水浴 2．4供试品溶液的制备分别精密称取红芪多糖I、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ0．29，分别加入2N 100。C水解8h，水解液用NaOH调pH值至中性，加乙醇使乙醇浓度Y口80％，离心，取上清液， 减压回收乙醇并浓缩至干，残渣加水溶解定容至lOml，作为供试品溶液。分别取对照品溶液、 供试品溶液各30ul用2．1色谱条件测定，色谱图见图l。 Z舯●舯earn●脚O胂12∞1‘．∞I●舶●．∞￡∞●∞●舶●舶O舯i柚1●柚■“ -●■-■●‘- A B ∞ⅧⅢⅢ∞∞Ⅻ■E ∞∞∞∞∞∞m∞ ⅫmⅢⅢⅢ1∞¨