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第3章 基因工程的酶学基础(植物基因工程)
第一节 限制性核酸内切酶
第二节 DNA 连接酶
第三节 DNA聚合酶
第四节 DNA修饰酶;;;;;;;回文结构:指的是反向重复的一段DNA序列,其特点有二:
1、以某一对核苷酸为中轴,左右同数目的核苷酸彼此呈碱基互补。
2、这两股DNA链若按同方向阅读(如5/ ? 3/),其核苷酸顺序相同;;;;;;;;;;;;前3个字母。属种名。
大写字母。菌株类型。
罗马字。第几种酶。
同属不同种,前2个字母相同时,取第三个字母。; 4碱基识别的限制酶为:44=256
5碱基识别的限制酶为:45=1024
6碱基识别的限制酶为:46=4096
7碱基识别的限制酶为:47=16384
8碱基识别的限制酶为:48=65536;;;;;;;概括起来,诱发星活性的因素有如下几种:
(1) 高甘油含量(5%, v/v);
(2) 限制性内切核酸酶用量过高(100U/ugDNA);
(3) 低离子强度(25 mmol/L);
(4) 高pH(8.0以上);
(5) 含有有机溶剂,如DMSO(二甲基亚砜 ),乙醇??;
(6) 有非Mg2+的二价阳离子存在(如Mn2+,Cu2+,Co2+,Zn2+等)。;5. 酶对消化效率的影响 ;;;;;酶切反应体系;各种不正常的酶切和电泳结果;高质量DNA电泳;;;;;;;;;;3. 连接酶的浓度;?;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;;思考题
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