第七章 基因操作与克隆载体.ppt

四、常用的载体 （2）质粒DNA的构型 ? SC(CCC covalently close circular DNA )构型:两条 核苷酸链均保持着完整的环形结构，DNA呈现超螺旋。 ? OC(open circularDNA)构型:两条链中只有一条保持着完整的环形结构，另一条链出现缺口，称之为开环DNA。 ? L(linear构型:DNA的双链均发生断裂而形成线性分 子。 四、常用的载体 ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 四、常用的载体 四、常用的载体 (3)质粒的命名原则 ? 用小写字母p代表质粒，在p字母后面用两个大 写字母代表发现这一质粒的作者或实验室名 称。后面的数字是构建质粒的编号。如： pUC18和pBR322。 （4）质粒的构建 ? 加入合适的选择标记基因，通常是抗生素基因。 ? 增加或减少合适的酶切位点，便于重组。 ? 缩短长度，切去不必要的片段，增加装载量。 ? 改变复制子，由严紧变为松弛型，以增加拷贝数。 ? 加装特殊的基因元件。 （5） 质粒的分类 ? 多拷贝质粒：用于扩增外源基因。 ? 测序质粒：加装测定顺序所必需的序列。 ? 整合质粒：装有整合促进基因及整合特异序列。 ? 穿梭质粒：能在两种不同的受体细胞中复制。 ? 表达质粒：装有强的启动基因。 ? 探针质粒： 筛选克隆或寻找基因元件。 四、常用的载体 (6) 实验室常用质粒 ? pBR322 4.3kb多拷贝松弛型，内含一个（Ori)、一个抗氨 苄青霉素（Ampr ）和一个抗四环素（Tetr ）标 记基因。 四、常用的载体 ? pUC18/19 2.8kb，含一个复制起点（Ori)、一个抗性基因Ampr ，一个改造的大肠杆菌β-半乳糖苷酶基因lacZ/,在lacZ/ 基因中有一段人工合成的含多种内切酶的单一切点，在此位点上插入外源DNA都能灭活下游lacZ/基因。 四、常用的载体 DNA的损伤原因： 1.DNA分子的自发性损伤 (1) DNA复制中的错误 (2) DNA的自发性化学变化 a.碱基的异构互变 b.碱基的脱氨基作用 c.脱嘌呤与脱嘧啶 d.碱基修饰与链断裂 2.物理因素引起的DNA损伤 (1) 紫外线引起的DNA损伤 (2) 电离辐射引起的DNA损伤 a.碱基变化 b.脱氧核糖变化、 c.DNA链断裂 d.交联 复习 3.化学因素引起的DNA损伤 (1) 烷化剂对DNA的损伤 a.碱基烷基化 b.碱基脱落 c.断链 d.交联 (2)碱基类似物、修饰剂对DNA的损伤 复习 分子改变类型： 点突变 (point mutation) ： 指 DNA 分子上一个碱基的变异（置换）。 (1)、转换 (transition) ：发生在同型碱基之间的置换 (2)、颠换 (transversion) ：发生在异型碱基之间的置换 突变效应： 同义突变 错义突变 无义突变 终止密码突变 抑制基因突变 移码突变 DNA的修复系统 (一)回复修复 1.光修复 2.单链断裂的重接 3.碱基的直接插入 4.烷基的转移 (二)切除修复(excision repair) (三)重组修复(recombinational repair) (四)SOS修复 复习 1． 转座子的分类和结构特征 a. 简单转座子 转座子（transposon，Tn）是存在于染色体DNA上可自主复制和移位的基本单位。 最简单的转座子不含有任何宿主基因而常被称为插入序列（insertion sequence，IS），它们是细菌染色体或质粒DNA的正常组成部分。一个细菌细胞常带有少于10个IS序列。转座子常常被定位到特定的基因中，造成该基因突变。IS序列都是可以独立存在的单元，带有介导自身移动的蛋白。 b.复合式转座子（composite transposon）是一类带有某些抗药性基因（或其他宿主基因）的转座子，其两翼往往是两个相同或高度同源的IS序列，表明IS序列插入到某个功能基因两端时就可能产生复合转座子。一