第二章 基因工程基础知识—自制.ppt

第二章 基因工程;主要内容： 基因工程概述及基本技术路线 基因工程基础知识 重组DNA技术所需的基本条件 （1）工具酶 （2）载体 （3）受体菌或受体细胞 4. 重组DNA技术的操作过程 （1）目的基因的获得 （2）DNA重组及导入受体细胞 （3）重组子的筛选及鉴定; 第一部分 基因工程概述 1. 基因工程概述;2、基因工程研究的重大历史事件;1944 Avery 肺炎双球菌转化试验;1953;;;;;;;;3. 基因工程理论依据： （1）不同基因有相同的物质基础 所有生物的DNA组成和基本结构都相同。不同生物间的DNA可以重组互换。病毒的遗传物质RNA可通过反转录产生cDNA（互补DNA），不影响基因的重组或互换。 （2）基因可以切割 限制性内切酶可将基因从DNA分子上切割下来。;（3）基因可以转移 DNA分子可在生物体内和不同生物体间转移，插入到靶DNA分子间。 （4）多肽与基因间存在对应关系 一种多肽就有一种相对应的基因。“一个基因，一个酶” ;（5）遗传密码可以通用;;4. 基因工程突出的优点;5. 基因工程基本路线图;; 分（离目的基因） 切（割目的基因 和载体） 接（连目的基因 和载体） 转（化宿主细胞） 筛（选阳性克隆） 表（达目的基因） ; 为了解按人们的设计对不同的DNA分子或DNA片段进行重组的过程，我们先来复习一下DNA的组成、结构和功能。 ;第二部分 核酸的基础知识;涉及内容： 1.核酸的分类 2.核酸的组成 3.核酸的结构 4.核酸的性质 5.核酸的功能 ;第一节 核酸的分类与功能 一、核酸的分类 核酸是存在于细胞中的一类大分子酸性物质，可分为以下两类： ;二、核酸的功能 1、DNA （1）DNA是主要的遗传物质 ① DNA是可通过复制遗传给下一代。 染色体由DNA和蛋白质组成，是遗传信息的载体。 ② DNA的组成差异决定了细胞中所有蛋白质、RNA的结构特征。 子代利用遗传下来的DNA可以制造与父代相同的RNA、蛋白质，故种瓜得瓜、种豆得豆。 ;③ 多细胞的DNA控制了细胞分化、个体形成乃至个体的生老病死。 任何一个多细胞生物的体细胞都含有完全相同的DNA。 提问：为什么人体各组织器官的细胞形状各 异、功能不同？ 答案：不同细胞不同部分DNA发挥了作用 （即表达），其余DNA休眠。;（2）DNA的存在形态 DNA为双链分子，其中大多数是链状结构大分子，也有少部分呈环状结构。;2、RNA 参与遗传信息的表达，在蛋白质的合成中起着重要的辅助作用。 主要可分为以下三类： ;1.mRNA 信使RNA;第二节 核酸的组成;核酸的组成成分 ;戊糖;;核苷酸;八种核苷酸如下表所示 ;第三节 核酸的结构;A.DNA碱基互补原则; DNA 一 股 的 核 苷 酸 序 列 与 另 一 股 的 序 列 互 补（A-T、G-C）。 ;B.二级结构—B型双螺旋结构; ;A、B、Z型DNA双螺旋结构;3.3 DNA的三级结构A. 真核生物的核小体;B.原核生物及真核生物细胞器DNA为共价闭环双螺旋，再进一步的盘旋形成超螺旋三级结构。;超螺旋方向与双螺旋（右旋）方向相反，为负超螺旋，即左旋。;3.4 RNA的结构;b. tRNA的三叶草型二级结构;c. tRNA的“倒L”型三级结构;第四节 核酸的性质;D.紫外吸光性 提问：为什么核酸有紫外吸光性？ 答案：碱基含有共轭大π键，最大吸收波长 260nm(*蛋白质280nm)； 4.2 核酸结构的稳定性：相当稳定 （1）碱基对之间的氢键 （2）芳香族碱基π电子之间相互作用形成的碱基堆积力。 （3）环境中的阳离子与磷酸残基上负电荷形成的离 子键;4.3 变性与复性 （1）什么是核酸的变性？ 答案：DNA双螺旋二级结构（氢键断裂）被破坏，形成单链无规线团状态，生物活性的丧失或部分丧失。 注意：变性不涉及磷酸二酯键的断裂，它的一级结构(碱基顺序)保持不变。磷酸二酯键的断裂称核酸降解。 ;（2）变性因素：