缺氧状态下HUVECs细胞内外GDF-15水平的变化.docVIP

精品论文 参考文献 缺氧状态下HUVECs细胞内外GDF-15水平的变化 江苏省连云港市第一人民医院心内科 222202 生长分化因子15（GDF-15）是 TGF-beta;超家族中的一员，Bootcov等科学家早在1997年就有关于GDF-15蛋白结构和生物学功能的报道[1]。GDF-15在细胞内是以二硫健形式结合的非活化的二聚体蛋白前体，经过酶解以受体介导的胞吐方式向细胞外释放的具有生物活性的分泌形式单体蛋白。GDF-15主要表达于胎盘和前列腺中[2-3]，在心脏和其它重要脏器处于应激时也有大量表达。在心肌缺血缺氧过程中，伴随着大量心肌组织和细胞的能量代谢紊乱，引起缺血局部趋化因子和炎症因子的表达增高[4]。缺血心肌组织分泌的组织生长因子例如血管内皮生长因子（VEGF），转化生长因子-beta;（TGF-beta;），结缔组织生长因子（CTGF）等具有促进缺血区域血管新生的效应[5-8]。这些生长因子可以促进内皮细胞的增殖和血管再生的代偿功能，从而在缺血缺氧的心脏局部微环境发生血管新生和侧枝循环建立，即在缺血性心脏病中常发生的血管重构现象。本实验志在研究缺氧状态下脐静脉内皮细胞表达GDF-15的变化。 【摘 要】目的：观察缺氧状态下HUVECs细胞内外GDF-15水平的变化。方法：HUVECs取自健康的破腹产产妇分娩后新鲜的婴儿脐带，经分离、培养获得；通过化学缺氧的方法模拟体内心肌缺血时的组织缺氧环境；用PCR法测定需要检测的基因（mRNA），用western blot.检测需要检测的蛋白表达水平，用ELISA法测定HUVECs上清液中GDF-15因子浓度；检测在缺氧（0、2、6、12、24、36、48h）时HUVECs细胞中GDF-15基因和蛋白表达水平及细胞上清液中GDF-15因子浓度；结果：HUVECs在缺氧2h时细胞中GDF-15的mRNA水平较0h、6h、12h、24h、36h、48h显著上调，随缺氧时间延长，表达水平逐渐下调，灰度比0.77plusmn;0.08 VS 0.22plusmn;0.04、0.33plusmn;0.09、0.35plusmn;0.04、0.29plusmn;0.09、0.19plusmn;0.06、0.15plusmn;0.04，p＜0.05；缺氧2h、6h时细胞中蛋白水平较0h、12h、24h、36h、48h明显升高，随着缺氧时间延长，蛋白水平逐渐下调，灰度比0.36plusmn;0.04、0.30plusmn;0.00 VS 0.06plusmn;0.00、0.15plusmn;0.02、0.10plusmn;0.03、0.09plusmn;0.02、0.06plusmn;0.01，p＜0.05；细胞上清液中GDF-15水平缺氧2h组较0h、12h、24h、36h、48h 显著上调，随着缺氧时间延长，逐渐下调，11.93plusmn;1.55 VS 3.43plusmn;0.76、4.73plusmn;0.76、4.6plusmn;1.3、4.0plusmn;0.56、3.43plusmn;1.04，p＜0.05；结论：缺氧可导致HUVECs细胞内源性的GDF-15的转录、翻译和分泌水平出现上调，但长时间缺氧导致内源性GDF-15的水平急剧下调。. 【关键词】缺氧；生长分化因子-15；人脐静脉内皮细胞； 【中图分类号】R845.2+2【文献标识码】A【文章编号】2096-0867（2015）-11-091-03 Objective：To explore the change of the level of GDF-15 inside and outside the human umbilical vein endothelial cells（HUVECs）in hypoxia.Methods：HUVECs were obtained from cord blood of healthy cesarean delivery，isolated and cultured in vitro. We used the chemical hypoxia method which mimicked the myocardial ischemia condition in vivo. The mRNA levels of interested genes were detected by RT-PCR，the proteins levels by Western blot，and secretion levels of GDF-15 from HUVECs by ELISA. The mRNA，protein and supernatant levels of GDF-1