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One of Two Major Paralogs of AVR-Pita1 Is Functionalin Japanese Rice Blast Isolates两个主要的旁系AVR-Pita1的一个 在日本水稻稻瘟病菌是有 功能的 2012-12-3 摘要 我们分析了在日本稻瘟病无毒基因AVR-Pita1以确定它们是如何获得对于栽培稻含Pita的抗性基因无毒特性的。一个无毒隔离基因（OS99-G-7A G7A），从日本的商业领域中的两个旁系同源的AVR Pita1，定为AVR-Pita1 JA 和AVR-Pita1 JB 。 对于收集来自日本不同地区的野毒株的分析发现 大多数的AVR-Pita1基因由日本水稻稻瘟病进行携带的，基因型为AVR-Pita1JA 或AVR-Pita1JB 。这些在日本分离株的毒力菌株的主要旁系同源的关系表示，AVR-Pita1 JA 是有功能性但AVR-Pita1J在G7A中的情况下没有。 在这项研究中，我们 讨论日本水稻的性质和生理物种分化，凸显出与的毒性对含Pita的米。此外，我们提出了一个方法放大AVR-Pita1 JA和 AVR-Pita1 JB 分离和分化，在日本监视功能性的AVR-Pita1。 关键词 稻瘟病菌 稻瘟菌 简介 稻瘟病是稻瘟病菌（无性 稻瘟病菌） 是全球范围内影响经济效益最重要的水稻病害。超过40个稻瘟病抗性基因 疾病已经被鉴定出，并已繁育成新栽培 品种。然而很多具有抗性基因的水稻品种 在投入商业化生产1至6年就会变得易患的疾病 。这些疾病通过自发毒性突变体产生的的暴发 导致了抗性栽培水稻抗性品种的选取压力。 简介 在日本，几乎所有的来自稻田水稻稻瘟病菌 对含有Pita基因栽培水稻品种都是无毒的：（ 99％的 所有稻瘟病菌）。 在日本Pita是最有用的水稻抗性基因 ，很多含有Pita近等基因的品系已经被培育出。然而含有Pita基因的新栽培稻品种在生产上的应用增加了新的毒性变种的发展和新的栽培品种将会变得感病Pita和其相应的无毒基因AVR-Pita 已经被确定并且特化分离出来。 简介 Pita位于染色体 上，12个水稻基因组和编码的蛋白质具有束缚性核苷酸位点位于 和一个富含亮氨酸重复（LRR）结构域。AVR- Pita位于3号染色体的端粒区编码推定的锌金属蛋白酶。 最近，它被发现 AVR-Pita构成了一个基因家族功能性和非功能性 无毒基因相似的序列（AVR-Pita2 AVR-Pita3）的稻瘟病菌来自不同的寄主上。 AVR-Pita 被更名为AVR-Pita. 　　　材料与方法 水稻稻瘟病菌。 我们采用OS99-G7（G7A）和13个独立的根据DNA改变型影响还有Pita基因的栽培水稻毒力来分类的致命的突变体， G7A 是从日本商业稻田获得的菌株。它有用来鉴定他的一个独特的DNA序列，所有的突变体是独立的，并自发地发展。 材料与方法 PCR扩增，克隆和测序。 水稻稻瘟病菌 在马铃薯葡萄糖培养液（PDB）中培养2或3天，和DNA 使用ISOPLANT II试剂盒提取（日本基因有限公司， 东京）。使用Gene Amp PCR系统进行PCR 9700（Applied Biosystems公司，福斯特，加利福尼亚州）。 材料与方法 对于直接序列分析， AVR-Pita1用基础AVR-PitaN89扩增， （5-CCGCCTTTATTGGTTTAATTCGGATA-3）和BamHIAVR-PitaR1 （5-ATGGATCCTCCATTCC AACACTAACG-3）。对于PCR反应中，50微升的反应混合物中含有 ≈50纳克DNA的基因组 关于克隆，G7A的AVR-Pita1的扩增使用BamHIAVR PitaL1（5-AAGGATCCGGAGCCGAGTCGTTCT GA-3）和BamHIAVR PitaR1引物。AVR-Pita1的S06-14-1启动子区域的检查 材料与方法 进行PCR扩增使用三套引物　　　 如下：BamHIAVR-PitaL1和BamHIAVR PitaR1 AVR-Pita410-394（5-TTATGTAGTTATTAATAATATGGGCC-3）和 BamHIAVR-PitaR1;AVRPita-210-181（5-AGTCAAGCTG AAATAATAAATAAGTTGGCG-3） 讨论 AVR-Pita1JB被保留在所有G7a-derived突变体而AVR-Pita1JA被删除或修改。 这一结果表明AVRPita1JA在G7a是有作用的但在AVR-Pita1JB是没作用的 分析表明G7a-derived突变体突变最频繁的是缺失AVR-Pita1JA的 讨论 本研究澄清两种AVR-Pita1的影响基因通过分析日本隔离着两个同