流感复合多表位核酸疫苗的构建及其表达研讨.pdfVIP

中国畜牧兽医学会禽病学分会禽流感及免疫抑制病论坛论文集 流感复合多表位核酸疫苗的构建及其表达研究 金扩世，金宁一，贾雷立，郑敏，金洪涛，连海，李 昌，王瑞琳，鲁会军 中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所，长春，吉林省，130062 摘要 目的研究流感病毒复合多表位核酸疫苗的构建及其表达产物的抗原性。 方法根据各表 段长765 达，并用免疫荧光方法初步检测该抗原蛋白的抗原性。 结果 成功构建了融合表达载体pRI—Epi和 结论流感病毒多表位抗原基因的设计是成功的，其在CEF细胞中表达的重组融合蛋白具有良好的抗原性， 可能是较理想的人、禽流感疫苗侯选物。 关键词流感；表位；核酸疫苗 virus， 流行性感冒(简称流感，Influenza)是由流感性感冒病毒(简称流感病毒，InfluenzaIV) 引起的一种古老的疾病，公元1173年发生了第一次流感样疾病的流行，在以后的几百年内有几十次流感流 行。 的人力资源和物力资源的损失。1997年5月中国香港一名3岁儿童死于多脏器功能衰竭，病原经美国疾病 南、泰国感染禽流感H5NI发病并致死的报告。2005年初，泰国科研小组研究证实禽流感可以通过人际传播。 目前世界各国正面临着疫情大流行这样极为严重的潜在威胁。如果禽流感在人际间传播能力增强，那么人 类因此而死亡和染病情况将十分严重。 到目前为止，免疫接种是防制流感最为有效的手段。但由于流感病毒易变异，所以至今尚未开发出长 期有效的疫苗。解决这一问题的途径之一是研制表位疫苗，这是由于表位基因的构建易于改造和操作，对 于如流感病毒、HIV等易发生抗原漂移和变异的病原体则可通过随时监视和及时改构来实现对变异毒株传播 的控制。表位疫苗的另一优势还在于通过选择最佳和最具免疫保护潜力的表位以诱生特异性免疫应答，尽 其进行了真核表达系统进行了体外表达，为进一步动物试验奠定基础。 1材料与方法 1．1材料 a由本实验室保存；CEF细胞由本实验室 1．1．1菌株和质粒质粒pRIESneo、pUCM-T—H57及大肠杆菌DH5 41 中国畜牧兽医学会禽病学分会禽流感及免疫抑制病论坛论文集 尔滨兽医研究所，H3阳性血清由本试验室保存。 l。2方法 1．2．1流感复合多价抗原基因的设计与合成根据各表位基本独立的要求，结合计算机分析，选择H3、H9 P 基因，各表位间用…P S一隔开，在57端用一C—C一与起始密码子(ATG)相连；在37端用一P—C-G一与终止密 码子(T从)相连，以保证各表位的基本独立。设计的基因由大连宝生物工程有限公司合成。 1．2．3 以NotI+EcoR 真核表达载体pIRE—Epi／pIRE—H57一Epi的构建及鉴定I双酶切质粒pMDl8一T I单 酶切pUCm—T—H57和pMDl8一T I+EcoR V单酶切pRIESneo，以Sal pUCm—T—H57一Epi，然后以EcoR 克隆到pRIgSneo中，构建表达载体pIRE-H57一Epi。对所构建的载体进行酶切鉴定。 1．2．4核酸疫苗在CEF细胞中的表达重组质粒用脂质体法转染CEF细胞，即于60minX30me培养板中接 RPMIl640 加入重组质粒20垤混匀，温育30min，然后将后者滴加于前一液体中，混匀，室温下作用30min。将上述 混匀液加入CEF细胞中共转染。 1．2．5 拍照。 2结果 Simple，序列分析结果与设计相同。 Epi。载体质粒为pMDl8-T