海洋无脊椎动物细胞培养研究.pdfVIP

————————————＼!!!!查量塑窒竺堂查垒堡墨堡l 海洋无脊椎动物细胞培养 钟秀颖+ 王昌留 (鲁东大学生命科学学院，山东烟台，264025) 摘 要：近年来，人们将越来越多的关注投向海洋生物。对于海洋无脊椎动物的研究，无论是理 论探索还是实际应用都有着重大价值。然而，自上世纪创立动物细胞培养技术以来，海洋无脊椎 动物的细胞培养却远远落后于哺乳动物和昆虫。本文综述了一些海洋无脊椎动物细胞培养的研 究工作，总结了目前面临的困难，并展望了海洋无脊椎动物细胞培养的前景。 关键词：海洋无脊椎动物；细胞培养；原代培养；细胞系 所谓细胞培养是指将有机体内的某一组织，如动物的肝、肾或肌肉等取出，使其分散成单个细胞，在人工条 件下使其存活、生长和分裂的技术。人类首次成功进行的动物细胞离体培养是由Arnold于1880年报道的。 养之父”[引。 自从创立动物组织和细胞的体外培养方法以来，细胞培养技术不断发展进步。然而，一直以来对于细胞培 养技术本身的研究主要集中于脊椎动物(特别是哺乳动物)和昆虫，对于水生无脊椎动物细胞培养的关注却相 对较少。20世纪60年代末70年代初，对于水生无脊椎动物细胞培养的研究才开始进行。在公开发表的有关 细胞培养问题的论文中，绝大多数是脊椎动物和昆虫的。目前世界上几个主要的细胞库ATCC(美国菌种保藏 有建立细胞系。现在的研究只是在原代培养方面取得了一些进展，并成功的使细胞在体外保持较长时问的活 性‘1，3|。 1 虾 1．1 研究意义 近30年来，随着虾养殖业的发展，对虾已成为海水养殖中一种重要的经济养殖品种。但进入20世纪90 年代，我国及亚洲其它地区爆发大规模对虾病毒性流行病，给对虾养殖业造成了沉重打击Ⅲ。而细胞培养技术 是研究病毒学的基础，可用于病毒的分离、纯化、疫苗和单克隆抗体的制备以及病毒敏感药物的筛选，这种方法 在NgL动物病毒性疾病的研究和治疗上已非常普遍‘4‘51。另外，细胞培养为内分泌学的体外研究，尤其在蜕皮 内分泌调节方面，提供了描述这一复杂系统的有效手段‘61。 *作者简介：钟秀颖(1984一)，女，辽宁省海城市，在读硕士。E—mail：zxy_wawJ@163．com 1．2研究背景与现状 脏等组织进行过原代培养。此后几年，另一些学者也进行了甲壳动物细胞的培养工作。但是，所有这些细胞培 养都限于原代培养，继代培养均不成功。1986年，Chen等首先对斑节对虾卵巢和心脏的细胞进行体外培养， 并成功地将卵巢细胞传代三次Ⅲ。 细胞培养时所取组织包括甲壳下表皮、心脏、肝胰腺、鳃、肠上皮、淋巴、血淋巴、卵巢、神经、肌肉和造血组 织等。从培养结果来看，类淋巴组织的培养较易成功，其次是卵巢组织m引。尽管大部分组织都有较成功的原 代培养的报道，然而，到目前为止，还没有建立起对虾细胞系[7]。 2 软体动物 2．1研究意义 2．1．1 在免疫学中的应用 软体动物血细胞与病原菌体外共培养的方法已经广泛应用于研究免疫的细胞和分子机制。而且，很多软 体动物是人类寄生虫的中间宿主，所以对于寄生虫在软体动物血细胞寄生阶段其宿主的免疫机制引起人们的 广泛关注‘3愚…。 2．1．2 在神经生物学中的应用 软体动物的神经系统相对简单，易鉴定并适于机械和电生理操作，其神经细胞的培养已广泛应用于神经轴 突生长和再生的研究[3’6]。 2．1．3 在肿瘤生物学中的应用 从20世纪60年代开始，相继发现美国海岸双壳类软体动物容易产生各类肿瘤，如性腺瘤、造血细胞瘤等， 而且有着很高的发病率。利用细胞培养的方法对于其诱因和发生机制研究的比较多。遗憾的是软体动物的肿 瘤细胞和其正常细胞一样很难在体外长时间存活，没有表现出很强的增殖能力‰6|。 2．1．4 在环境监测中的应用 双壳类软体动物过滤性摄取食物，很容易在体内富集污染物，所以一直是水污染检测的良好材料。而分散 的细胞较动物个体来说不仅操作简单、检测周期短、灵敏度高，而且可以进行细胞毒性机制的研究。还可以利 用酶活性、DNA断裂指数等作为指标进行分子和生化水平的分析，显示出广泛的应用价值嘲。 2．1．5在水产养殖中的应用 软体动物的一些种类如贝类、牡蛎等都是重要的经济养殖动物，但是近年来也受到一些感染性病原的侵 害。开展贝类的细胞培养工作将有助于对贝类病毒和原虫进行分