海洋细菌9912的鉴定及其抗真菌活性物质性质的初步研讨.pdfVIP

摘 要 海洋微生物是生物活性物质的新来源。本论文通过对一株采自海泥的海洋细 菌9912及其活性物质的研究得到以下主要结果。 分离自渤海海泥的海洋细菌9912通过经典的细菌学鉴定及16SrRNA分子生 物学鉴定，确定为地衣芽抱杆菌(Bacilluslichen如rmus。海洋细菌9912能够产 生抗真菌活性物质，对三种致病真菌白念珠菌 (Candidaalbicans)、新生隐球菌 (Cryptococcus neoforms)、石膏样毛癣菌 (Trichophytonmentagrophytes)都有 明显的抑制作用。 应用均匀设计的方法，确定了海洋细菌9912发酵培养基23配方为玉米粉: 1%，豆饼粉:O}6%,葡萄糖:0.5%,ZnSO4:0.04%，MgSO4:0.02%， KH2POa:0.04%。其培养条件为:种子液种龄12h，接种量5%，培养基初始PH8.0, 装液量为50m1/500ml三角瓶，培养温度28`C，发醉时间22h时活性达到最高， 此时，应用二剂量法，以制霉菌素为标准样品，测得海洋9912发酵液的活性相 当于 mu/8005.l 通过离子交换层析、疏水层析、分子排阻层析等一系列分离纯化，得到了 抗真菌活性物质的水溶液，经高效液相色谱检测显示为一个主要吸收峰(条件为 Cis反相柱，0^-30%乙睛梯度洗脱，220mn紫外监测)，经基质辅助激光解析/ 离子化一飞行时间质谱(MALDI-TOF)检测得到分子量为1873D。活性物质带少量 正电荷，能够被链酶蛋白酶水解失活，双缩服反应呈阳性，200nm处有最大的紫 外吸收峰280nn」没有吸收峰，具有多肤的特征，并且比较耐高温。 关键词:海洋地衣芽抱杆菌 抗真菌活性物质 分离提取 WangLie(microbiology) Direct勿HuJiangchun(Prof) Marineisanewsourceofbiologicalactiviytsubstance.Thisarticle reportedresearchonbacteriumstrain9912isolatedrfomseamudandits antifungal ce,whitchhasachievedthefollowingachievements. Bacteriumstrain9912whichwasisolatedrfomseamudwasdetermined asBacilluslicheniformusbyclassicalsystematicbacteriologicalidentification and16SrRNAmolecularbiologicalanalysis,anditsantifungalsubstancecan inhibitBacilluslicheniformus, Cryptococcus neoformsandTrichophyton mentagrophyteso Asimpleandlow-costculturemediumwasobtainedbyUniformDesign, themediumwasformulatedas:1%ofcorn flour,0.6%ofbeancakeflour, 0.5% ofglucose, 0.04% of ZnS0410.02% ofMgSO4and0.04% of KH2P04.Also,theculturalconditionswasoptimized，Theantibioticactiviyt reachedthesummitundersuchconditions:seedcultural-timewas 12hours, inoculationquantiytwas5%(v/v),initialpHwas8.0,culturetemperature was280Candfermentationperiodwas22hours.Theactiviytofstrain9912 fermentationbrothwas5800u/mldetected勿2-dosemethod(usinnystatin actsthestandardsubstance) Through iron-exchange chromatography, hydrophob