海洋细菌Bacillus+pumilus+PLM4抗肿瘤多糖的分离纯化及结构研讨.pdfVIP

福建曩订 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 海洋细菌BacillusPLM4抗肿瘤多糖的分离纯化及 pumilus 结构研究 梁静娟庞宗文王松柏詹萍马丽 (广西大学生命科学与技术学院，南宁530001) (第——作者Tel：86771—3270730；e—maih jj!i垒垒g鱼g兰坠：曼垒坠：曼旦) 摘要：海洋短小芽孢杆菌BacillusPLM4发酵液经离心去除菌体、减压浓缩、透析去 pumilus G．100凝胶柱层析分离纯 盐、乙醇沉淀提取得粗多糖，粗多糖经SephadexG．50和Sephadex 化可得纯化多糖。采用高效凝胶渗透色谱法测定多糖的分子量及纯度，硫酸一咔唑法测定己 糖醛酸含量，2，4一二硝基苯肼比色法测定丙酮酸根含量，氯化钡明胶比色法测定硫酸根，茚 三酮反应测定蛋白质含量，气相色谱法测定中性糖组分。结果表明，该多糖分子量为116，000， 含56．96％的己糖醛酸和O．83％丙酮酸根，不合硫酸根，不合蛋白质，该多糖的中性糖组分 有甘露糖和葡萄糖，它们的摩尔比为3．37：1．00。抗肿瘤活性的初步研究表明该纯化胞外多 糖的体外抑制人喉癌Hep．2细胞生长的活性显著，G1501001ag／ml。经红外光谱分析、高碘 酸氧化以及Smith降解可知该多糖的糖基为p—D．吡喃甘露糖和p—D一吡喃葡萄糖构型，基本结 构是以1_÷3连接为主体，有较多的l一6连接分枝、少量的1—2连接和很少量的1叶4连接。 关键词：海洋细菌；抗肿瘤多糖；分离纯45；组分 近年来对多糖的抗肿瘤作用研究很热，研究发现不少多糖具有良好的抑制肿瘤生长和 提高机体免疫功能的作用，但目前发现的抗肿瘤多糖主要来源J：真菌和植物，有关细菌抗肿 瘤多糖尤其是海洋细菌抗肿瘤多糖的研究却很少报道，目前只有Umezawatt]报道从海洋细菌 Flavobacterium 中分离到有抗肿瘤活性的多糖。本课题组从广两北部湾红树林海洋淤泥中筛选到一株能产生 抗肿瘤多糖的细菌BacillusPLM4，该细菌具有很好的抑制肿瘤细胞生长J’内活性，其 pumilus 发酵液对人喉癌细胞Hep一2的生长抑制率为63．9％。本文对该细菌产生的抗肿瘤多糖的分离 纯化和初步结构进行了研究。 l材料与方法 1．1材料 1．1．1菌种 PLM4，本课题组从广西北部湾 具有抗肿瘤活性的海洋短小芽孢杆菌B．pumilus 红树林海泥中分离筛选得到。 blue) G一100为Pharmacia公司产品；阿利新蓝(Alcian 1．1．2试剂SephadexG一50和Sephadex 为Chroma进U分装；其余为色谱纯或分析纯试剂。 124 福毽覆门 第三届拇洋生物高技术论坛 2005．08．19—23 1．2方法 PLM4发酵液离一tj,(3000r／min，15min)除去菌体，上清 1．2．1多糖的提取将海洋B．pumilus 液50℃减胝旋转浓缩，对水透析脱盐，加入4倍体积的预冷无水乙醇，4℃静．II：过夜，离心 5 (8000r／min，1rain)得沉淀，经乙醇、丙酮洗涤，真空冷冻干燥得多糖粗品。 】．2．2多糖的分离纯化 将多糖粗品溶]：少景蒸溜水，分别上样于CM—cellulose柱、 G一50(1．8x46 cm)柱上，洗脱，用蒽酮一硫酸法【3】检测多糖 DEAE